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你還在為“菌落計數(shù)”所困擾嗎?技巧來了~

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-11-28
核心提示: 菌落計數(shù)菌落總數(shù)就是指在一定條件下(如需氧情況、營養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的細(xì)菌菌落
 菌落計數(shù)
菌落總數(shù)就是指在一定條件下(如需氧情況、營養(yǎng)條件、pH、培養(yǎng)溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的細(xì)菌菌落總數(shù)。
菌落計數(shù)是用來判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量,它反映食品在生產(chǎn)過程中是否符合衛(wèi)生要求,以便對被檢樣品做出適當(dāng)?shù)男l(wèi)生學(xué)評價。菌落總數(shù)的多少在一定程度上標(biāo)志著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。
目前,菌落計數(shù)一般采用的是平板菌落計數(shù)法,是種統(tǒng)計物品含菌數(shù)的有效方法。
在常規(guī)的微生物學(xué)實驗中,不管是食品衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測,還是藥品微生物限度檢查,還是研究活性物質(zhì)的抑菌性能實驗,都常常需要對樣品中的微生物進行定量或者濃度計算;眾多微生物定量方法中最常用的就是對培養(yǎng)后的培養(yǎng)皿上所生長菌落進行總數(shù)統(tǒng)計的菌落總數(shù)統(tǒng)計定量方法。

關(guān)于

計數(shù)的困擾

 

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如何保證檢測結(jié)果的有效性?

 

設(shè)計空白對照

(1)檢驗過程中需要做空白對照,用來判斷培養(yǎng)基、稀釋液、平皿或吸管是否存在污染,完美的空白試驗平板上應(yīng)該無細(xì)菌生長。

     

實驗環(huán)境要求

(2)定期檢測空氣潔凈度,判斷實驗環(huán)境是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

 

滅菌處理

(3)細(xì)菌檢測過程中所用到的一切用具和培養(yǎng)基都需經(jīng)過滅菌程序。

 

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如何提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性?

     

樣品消毒

(1)任何樣品在打開包裝前,都要在取樣開口處的周圍表面進行消毒。

(2)采樣時對于易堵塞吸管的樣品(如糕點面包辣條等),可以放置一塊無菌紗布在放樣液的容器瓶口下方,作過濾用。

 

稀釋度選擇

樣品的稀釋是菌落計數(shù)的關(guān)鍵步驟之一。對于固體或半固體樣品,通常需要將樣品均質(zhì)化后進行系列稀釋。建議使用無菌的生理鹽水或磷酸鹽緩沖液進行稀釋,并確保每次稀釋后的樣品均勻混合。對于液體樣品,可以直接進行稀釋,但同樣需要注意混合均勻性。選擇合適的稀釋度非常重要,一般建議選擇2-3個適宜的稀釋度進行檢測,以確保最終的菌落數(shù)在可計數(shù)范圍內(nèi)(30-300 CFU)。

 

參考值

參考值可能是實驗室經(jīng)驗累積的估算數(shù),也可能是樣品本身標(biāo)注的活菌數(shù)值。對于有經(jīng)驗的操作者而言,即使沒有明確的參考值,也能憑借經(jīng)驗準(zhǔn)確進行稀釋操作。然而,對于新手來說,缺乏參考值的情況下可能會感到迷茫。
在進行菌落計數(shù)時,首先盡可能獲取參考值。根據(jù)參考值,可以選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),然后將適量的樣品與適量的培養(yǎng)基混合,并進行均勻涂布。如此一來,可以保證每個培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)量在合適的范圍內(nèi),從而得到準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。

擴大計數(shù)范圍

選擇合適的稀釋倍數(shù)和擴大計數(shù)范圍是至關(guān)重要的。一種常見的策略是根據(jù)經(jīng)驗或參考值將樣品稀釋到一定倍數(shù),然后在不同梯度上進行涂布。例如,稀釋到10^-8的樣品可以選擇不同梯度的平板進行涂布,比如10^-8、10^-7、10^-6各三個平板。同時,也可以選擇其他梯度如10^-9、10^-5、10^-4各一個平板,并留出一個對照平板。
不同的食品其「菌落總數(shù)」的檢出限量也不一致,通常糕點類樣品中細(xì)菌量偏低,稀釋度應(yīng)選擇較小的,稀釋度可選1:10 。

微信圖片_20241128101304

 

其次,培養(yǎng)基的選擇和準(zhǔn)備也是影響菌落計數(shù)結(jié)果的重要因素。平板計數(shù)瓊脂(PCA)是常用的培養(yǎng)基之一,其滅菌條件為121℃、15分鐘。在傾注培養(yǎng)基時,應(yīng)確保培養(yǎng)基溫度適宜(約46℃),以避免高溫對微生物的殺傷作用。此外,對于一些特殊樣品,可以在培養(yǎng)基中加入適量的2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC),以便在培養(yǎng)后將菌落染色,方便計數(shù)。

 

 

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為什么瓊脂凝固后需要倒置?

 

平板倒置培養(yǎng),可以減少培養(yǎng)基中水分的蒸發(fā)影響細(xì)菌生長,又可以防止凝結(jié)在皿蓋上的水蒸氣流到培養(yǎng)基表面導(dǎo)致染菌出現(xiàn)菌落蔓延及難以計數(shù)。

 

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菌落蔓延的原因及解決辦法?


菌落蔓延主要有兩個原因,一是操作不當(dāng);二是樣品中含有變形桿菌等運動性強的細(xì)菌。

微信圖片_20241128101309

操作中需要注意3個關(guān)鍵點:

(1)傾注培養(yǎng)基時搖晃平皿使其混合均勻,減少菌塊;

(2)樣品稀釋后,盡快傾注平板。從稀釋到傾注結(jié)束時間控制在30分鐘之內(nèi),避免樣液干涸造成菌落成團;平板凝固后馬上倒置;

(3)若樣品中含有變形桿菌,則可以覆蓋一層培養(yǎng)基(約4mL)。

 

 

5






異常現(xiàn)象平板如何進行菌落計數(shù)?

 

微信圖片_20241128101313

 

在完成培養(yǎng)后應(yīng)立即進行計數(shù),通常選取30-300CFU菌落數(shù)、無蔓延菌落生長的平板作為計數(shù),但實際操作中會出現(xiàn)各種異,F(xiàn)象。

我們通過以下表格查看:

現(xiàn)象

計數(shù)方式

無任何明顯界限的鏈狀菌落

作為一個菌落

有幾條不同來源的鏈

每條鏈均應(yīng)按一個菌落計算

片狀菌落不到平板一半,而另一半又分布均勻

半個平板的菌落數(shù)乘2代表整塊平板的菌落數(shù)

文章來源:網(wǎng)絡(luò)轉(zhuǎn)載;

文字編輯:食品小測;

編輯:songjiajie2010

 
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