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前段時間,經(jīng)歷了幾個月的時間,為實驗室建了一個細胞培養(yǎng)間.目前這個細胞培養(yǎng)間運轉(zhuǎn)良好,培養(yǎng)的神經(jīng)元長了10來天,長勢不錯,已經(jīng)可以認為細胞培養(yǎng)室建立成功.在建立細胞培養(yǎng)間的過程中,碰到了許多問題,逐一解決后,覺得大家如果要建立細胞培養(yǎng)間,肯定也會碰到許多相同的問題,所以將我碰到的問題整理出來.首先向大家推薦一本書,個人認為是比較經(jīng)典的——《動物細胞培養(yǎng)-基本技術(shù)指南》科學(xué)出版社,英,R.I.弗雷謝尼.內(nèi)容不多,但以下的資料大部分是書上找不到的.
1.甲醛薰蒸:
40％甲醛溶液(藥用規(guī)格、福建三明化工總廠出品),用量30 ml／m3,室內(nèi)溫度21～24℃,相對濕度75％～85％,加熱薰蒸使蒸汽彌漫全室,關(guān)閉門窗1 h.
甲醛水溶液為無色,具有強烈刺激性氣味的液體,可殺滅多數(shù)微生物,價廉,熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等.市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛.其主要用法為:
①熏蒸消毒:對室內(nèi)消毒其用量為20－25%毫升/米,在加熱該溶液時最好同時煮沸一壺水,使室內(nèi)相對溫度保持在70-90%左右,室內(nèi)溫度最好在20攝氏度以上,作用時間12-24小時.如消毒皮毛服裝,甲醛水溶液的用量可加至125毫升/米,掛衣密度為每平方米3套為宜.熏蒸消毒時應(yīng)密閉門窗.消毒后一般多用自然通風(fēng)驅(qū)散甲醛氣體,其需時較長,急于排出氣體,可將25%氨水加熱蒸發(fā)中和.氨水用量為所用甲醛水溶液的一半,中和時間為30分鐘.
②自然揮發(fā): 將較大量的甲醛水溶液放入一敞開容器中,室內(nèi)溫度保持在18攝氏度以上,同時室內(nèi)噴水以保持相對濕度在70%以上,經(jīng)16小時可達到室內(nèi)消毒的目的.
關(guān)于甲酸、甲醛和甲醇三者的毒性比較:甲酸的毒性比甲醇大6倍,甲醛的毒性比甲醇大30倍.所以吃進4-10克甲醇,就能引起慢性中毒.它的毒性作用主要表現(xiàn)在損傷視力,使視力減退(不能矯正),視野縮小,以致雙目失明,直到死亡.
我的每個房間是7個平方,約20個立方.按書上的算要福爾馬林300ml,高錳酸鉀100g.
高錳酸鉀放入甲醛液體中后,在開始的3秒鐘內(nèi)沒有反映,3秒鐘以后,會產(chǎn)生大量煙氣.所以一旦在甲醛中加了高錳酸鉀請馬上離開滅菌室,并關(guān)上門.
高錳酸鉀放入甲醛液體中會使液體沸騰,所以反應(yīng)要在比較大的大口徑容器進行,本人用的是臉盆.
甲醛氣體毒性非常強,所以操作時一定要帶上防毒面具.
2.關(guān)于紫外線:
紫外線的穿透能力非常弱的,主要靠電離產(chǎn)生氧自由基來消毒.細胞培養(yǎng)室里面一些不能照射紫外的物件可以用一般的材料蓋住.如:玻璃和有機玻璃都可以的.紫外有些人認為大型精密的顯微鏡是不可以照紫外的,因為它們的鏡頭上涂的膜會被分解掉,但我特意問了我校光學(xué)系的老師,他們認為是沒有關(guān)系的.
紫外線在許多實驗室被認為是起心理安慰作用的.我參觀過的一個細胞培養(yǎng) 間他們的房間大約6平方米,但是只裝了30W的紫外燈,但前提是他們有一個層流系統(tǒng).
個人認為,如果細胞培養(yǎng)間有層流系統(tǒng),那紫外的作用是可以被忽略的,但如果沒有層流系統(tǒng),那么紫外的作用還是相當重要.
此外,不要擔(dān)心紫外不能照射到的角落,因為紫外殺菌功能除了紫外本身以外,還可以由產(chǎn)生的臭氧來完成.
臭氧過量吸入的作用應(yīng)該和雙氧水的作用是一樣的,個人認為也許有一定的致癌性.所以紫外滅菌以后,最好過一個小時再進去.
