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微生物培養(yǎng)應(yīng)該注意哪些?這套新手入門指南送給你!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-08-04
核心提示:微生物的生長(zhǎng),除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。 微生物的

微生物的生長(zhǎng),除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。

 

微生物的種類不同,培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同。

 

影響微生物生長(zhǎng)的因素


影響微生物生長(zhǎng)的因素很多,簡(jiǎn)要介紹如下:

(1)水分

水分是微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)中進(jìn)行生長(zhǎng)的必要條件。芽孢、孢子萌發(fā),首先需要水分。

微生物是不能脫離水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生長(zhǎng),而不能生活在純水中。各種微生物在不能生長(zhǎng)發(fā)育的水分活性范Χ內(nèi),均具有狹小的適當(dāng)?shù)乃只钚詤^(qū)域。

(2)溫度

在一定的溫度范Χ內(nèi),ÿ種微生物都有自已的生長(zhǎng)溫度三基點(diǎn):

 

最低生長(zhǎng)溫度

最適生長(zhǎng)溫度

最高生長(zhǎng)溫度

 

在生長(zhǎng)溫度三基點(diǎn)內(nèi),微生物都能生長(zhǎng),但生長(zhǎng)速率不一樣。微生物只有處于最適生長(zhǎng)溫度時(shí),生長(zhǎng)速度才最快,用時(shí)最短。超過最低或最高生長(zhǎng)溫度,微生物不會(huì)生長(zhǎng),甚至?xí)劳觥?/span>

 

一般情況下,ÿ種微生物的生長(zhǎng)溫度三基點(diǎn)是恒定的。但也常受其它環(huán)境條件的影響而發(fā)生變化。根據(jù)微生物最適生長(zhǎng)溫度的不同,可將它們分為三個(gè)類型:


a.嗜冷微生物:其最適生長(zhǎng)溫度多數(shù)在-10℃-20℃之間

b.中溫微生物:其最適生長(zhǎng)溫度一般在20℃-45℃之間

c.嗜熱微生物:生長(zhǎng)溫度在45℃以上。

 

(3)營(yíng)養(yǎng)物濃度

 

細(xì)菌的生長(zhǎng)率與營(yíng)養(yǎng)物的濃度有關(guān):μ=μmax*C/(K+C) ,營(yíng)養(yǎng)物濃度與生長(zhǎng)率的關(guān)系曲線是典型的雙曲線。

 

K值是細(xì)菌生長(zhǎng)的很基本的特性常數(shù)。它的數(shù)值很小,表明細(xì)菌所需要的營(yíng)養(yǎng)濃度非常之低。

 

然而營(yíng)養(yǎng)太低時(shí),細(xì)菌生長(zhǎng)就會(huì)遇到困難,甚至還會(huì)死亡。這是因?yàn)槌松L(zhǎng)需要能量以外,細(xì)菌還需要能量來維持它的生存。這種能量稱為維持能

 

(4)氧氣

 

按照微生物對(duì)氧氣的需要情況,可將它們分為以下五個(gè)類型。

 

a. 需氧微生物:這類微生物需要氧氣呼吸之用,û有氧氣,便不能生長(zhǎng)。但是高濃度的氧氣對(duì)需氧微生物也是有毒的,很多需氧微生物不能在氧氣濃度大于大氣中氧氣濃度的條件下生長(zhǎng)。絕大多數(shù)微生物都屬于這個(gè)類型。

 

b. 兼性需氧微生物:這類微生物在有氧氣存在或無(wú)氧氣存在情況下,都能生長(zhǎng),只不過所進(jìn)行的代謝途徑不同罷了。在無(wú)氧氣存在的條件下,它進(jìn)行發(fā)酵作用,例如酵母菌的無(wú)氧乙醇發(fā)酵。

 

c. 微量需氧微生物:這類菌是需要氧氣的,但只在0.2大氣壓下生長(zhǎng)最好。這可能是由一它們含有在強(qiáng)氧化條件下失活的ø,因而只有在低壓下作用。

 

d. 耐氧微生物:這類微生物在生長(zhǎng)過程中,不需要氧氣,但也不怕氧氣存在,不會(huì)被氧氣所殺死。

 

e. 厭氧微生物:這類微生物在生長(zhǎng)過程中,不需要分子氧。分子氧存在對(duì)它們生長(zhǎng)產(chǎn)生毒害,不是被抑制,就是被殺死。


實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)方法



根據(jù)培養(yǎng)時(shí)是否需要氧氣,可分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)兩大類。

 

1)好氧培養(yǎng):也稱“好氣培養(yǎng)”。這種微生物在培養(yǎng)時(shí),需要有氧氣加入,否則就不能生長(zhǎng)良好。

 

在實(shí)驗(yàn)室中,斜面培養(yǎng)是通過棉花塞從外界獲得無(wú)菌的空氣。

 

三角燒瓶液體培養(yǎng)多數(shù)是通過搖床振蕩,使外界的空氣源源不斷地進(jìn)入瓶中。

 

2)厭氧培養(yǎng):也稱“厭氣培養(yǎng)”。這類微生物在培養(yǎng)時(shí),不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養(yǎng)過程中,最重要的一點(diǎn)就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。一般可采用下列幾種方法:

 

a.降低培養(yǎng)基中的氧化還原電λ:常將還原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等,加入到培養(yǎng)基中,便可達(dá)到目的。有的將一些動(dòng)物的死的或活的組織如牛心、羊腦加入到培養(yǎng)基中,也可適合厭氧菌的生長(zhǎng)。

 

b.化合去氧:這也有很多方法,主要有:用焦性û食子酸吸收氧氣;用磷吸收氧氣;用好氧菌與厭氧混合培養(yǎng)吸收氧氣;用植物組織如發(fā)芽的種子吸收氧氣;用產(chǎn)生氫氣與氧化合的方法除氧。

 

c.隔絕阻氧:深層液體培養(yǎng);用石蠟油封存;半固體穿刺培養(yǎng)。

 

d.替代驅(qū)氧:用二氧氣碳驅(qū)代氧氣;用氮?dú)怛?qū)代氧氣;用真空驅(qū)代氧氣;用氫氣驅(qū)代氧氣;用混和氣體驅(qū)代氧氣。

 

根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài),可分為固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)兩大類。

 

1)固質(zhì)培養(yǎng):是將菌種接至疏松而富有營(yíng)養(yǎng)的固體培養(yǎng)基中,在合適的條件下進(jìn)行微生物培養(yǎng)的方法。

 

2)液體培養(yǎng):在實(shí)驗(yàn)中,通過液體培養(yǎng)可以使微生物迅速繁殖,獲得大量的培養(yǎng)物,在一定條件下,還是微生物選擇增菌的有效方法。

 

微生物實(shí)驗(yàn)室常用菌種保藏法

圖片

 

 

菌種的保藏常采用干燥、低溫隔絕空氣等措施,將其新陳代謝限制在最低范Χ內(nèi),使其生命活動(dòng)處于半永久性的休眠狀態(tài),使菌種能夠存活、不污染雜菌、不發(fā)生或較少發(fā)生變異,保存菌種原有的各種生物學(xué)性狀。

 

 

較常用的菌種保藏法有斜面或半固體傳代保藏法,以及冷凍真空干燥法液氮超低溫保藏法。

 

1. 斜面或半固體傳代保藏法

 

此法保藏菌種常用的培養(yǎng)基有普通肉湯瓊脂斜面、血清斜面、血瓊脂斜面、雞蛋斜面和血清肉湯半固體培養(yǎng)基等等。

 

在斜面或半固體培養(yǎng)基表面,往往加入滅菌液體石蠟,用以隔絕空氣。此外,厭氧菌的傳代保藏則常采用瘡肉基。

 

2. 冷凍真空干燥法

 

將加入一定保護(hù)劑(如無(wú)菌脫脂牛奶)的菌種懸液冷凍,然后在凍結(jié)狀態(tài)下經(jīng)過真空干燥,使菌種處于半永久性的休眠狀態(tài),從而達(dá)到長(zhǎng)久保藏的目的。一般可保藏?cái)?shù)年甚至數(shù)十年之久。該法需要特殊的低溫干燥設(shè)備。

 

3. 液氮超低溫保藏法

將保藏的菌種分散在保護(hù)劑中(如甘油、二甲亞楓、蔗糖和吐溫80等),或?qū)⑵桨迳仙L(zhǎng)良好的培養(yǎng)物打塊,原封不動(dòng)地置于保護(hù)劑中,預(yù)凍后保藏在液氮超低溫(-196℃)中。該法是目前較理想的菌種保藏方法,可較長(zhǎng)期保藏菌種。

編輯:songjiajie2010

 
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