下面詳細(xì)介紹一下革蘭氏染色法、乳酸酚棉藍(lán)染色法、芽孢染色法、莢膜染色、法鞭毛染色法

一、革蘭氏染色

1 操作步驟

涂片：將培養(yǎng)的不同菌分別作涂片（注意涂片切不可過于濃厚），干燥、固定。固定時(shí)通過火焰1-2 次即可，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。

初染：加結(jié)晶紫液蓋滿標(biāo)本處，染一分鐘后水洗，并將玻片上積水輕輕甩凈。

媒染：加碘液蓋滿標(biāo)本處，1分鐘后水洗，甩凈玻片上積水。

脫色：加95%酒精蓋滿標(biāo)本，輕輕搖動(dòng)玻片，約20秒鐘后水洗、甩干。

復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅液或沙黃溶液1-2滴蓋滿標(biāo)本，染30秒鐘后水洗，待標(biāo)本自干或用吸水紙印干。

觀察：鏡檢干燥后置油鏡觀察，革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn)，過于密集的細(xì)菌，常常呈假陽性。

二、乳酸酚棉藍(lán)染色法

1 操作步驟

  染色：于潔凈載玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉藍(lán)染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣外取少量帶有  孢子的菌絲置于染色液中，再細(xì)心地將菌絲挑散開，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時(shí)再換高倍鏡。

  觀察：染好后的標(biāo)本片用顯微鏡觀察結(jié)果，酵母菌細(xì)胞、菌絲體和產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)等皆可被染成亮藍(lán)色；背景為暗淡的藍(lán)色。

三芽孢染色法

1 操作步驟

一般革蘭氏染色只能把芽孢周圍的細(xì)胞質(zhì)染色，不能直接把芽孢染上，故芽孢會(huì)透亮，能夠觀察到芽孢。若不清晰可進(jìn)一步采用芽孢染色法。

染色：用接種環(huán)取菌樣涂布于玻片上，待自然干燥。而后通過火焰加熱將菌固定于玻片上。將涂片放入平皿內(nèi)，片上放兩層濾紙，滴加足量的5.0%孔雀綠水溶液。將平皿蓋好，54℃-56℃水浴加熱30min。取出，去濾紙，用純化水沖洗殘留孔雀綠溶液。加0.5% 沙黃水溶液，染1min。水洗，待干后油鏡觀察。

觀察：染好后的標(biāo)本片用顯微鏡觀察結(jié)果，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。

三、莢膜染色法

莢膜(capsule)是某些細(xì)菌表面的特殊結(jié)構(gòu)，是位于細(xì)胞壁表面的一層松散的粘液物質(zhì)，莢膜的成分因不同菌種而異，主要是由葡萄糖與葡萄糖醛酸組成的聚合物。

1 操作步驟

涂片：按常規(guī)法涂片，可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠菌液盡量涂開，涂布面積不宜過大。

干燥：在空氣中自然干燥。

染色：用溶液A染5-7分鐘。

脫色：用溶液B洗去結(jié)晶紫，脫色要適度（沖洗2遍）。用吸水紙吸干，并立即加1-2滴香柏油于涂片處，以防止CuSO4結(jié)晶的形成。鏡檢。

觀察：背景藍(lán)紫色，菌體紫色，莢膜無色或淺紫色。

五、鞭毛染色法

長在某些細(xì)菌菌體上細(xì)長而彎曲的具有運(yùn)動(dòng)功能的蛋白質(zhì)附屬絲狀物，稱為鞭毛。許多細(xì)菌都是運(yùn)動(dòng)的，通常使用鞭毛移向營養(yǎng)物質(zhì)。鞭毛很薄，不易染色和觀察。

1 操作步驟

涂片：取幼齡細(xì)菌培養(yǎng)物制成涂片。

干燥：火焰干燥及固定。

染色：鞭毛染色液2-3滴，在室溫中染色2-3分鐘。

脫色：水洗，干燥后鏡檢（油鏡）。

觀察：菌體和鞭毛呈紫色。