2、適用范圍:生測實(shí)驗(yàn)室

 

3、責(zé)任者:QC主管生測員

 

4、定義:無

 

5、安全注意事項(xiàng)

    嚴(yán)格無菌操作,防止微生物污染;操作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈.

 

6、規(guī)程

  6.1 無菌室應(yīng)設(shè)有無菌操作間和緩沖間,無菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級(jí),室內(nèi)溫度保持在20-24℃,濕度保持在45-60%.超凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級(jí).

  6.2 無菌室應(yīng)保持清潔,嚴(yán)禁堆放雜物,以防污染.

  6.3 嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染,已污染者應(yīng)停止使用.

  6.4 無菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液,如5％的甲酚溶液,70％的酒精,0.1％的新潔爾滅溶液,等等.

  6.5 無菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔,以保證無菌室的潔凈度符合要求.

  6.6 需要帶入無菌室使用的儀器,器械,平皿等一切物品,均應(yīng)包扎嚴(yán)密,并應(yīng)經(jīng)過適宜的方法滅菌.

  6.7 工作人員進(jìn)入無菌室前,必須用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在緩沖間更換專用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手),方可進(jìn)入無菌室進(jìn)行操作.

  6.8 無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上,并且同時(shí)打開超凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng).操作完畢,應(yīng)及時(shí)清理無菌室,再用紫外燈輻照滅菌20分鐘.

  6.9 供試品在檢查前,應(yīng)保持外包裝完整,不得開啟,以防污染.檢查前,用70％的酒精棉球消毒外表面.

  6.10 每次操作過程中,均應(yīng)做陰性對照,以檢查無菌操作的可靠性.

  6.11 吸取菌液時(shí),必須用吸耳球吸取,切勿直接用口接觸吸管.

  6.12 接種針每次使用前后,必須通過火焰灼燒滅菌,待冷卻后,方可接種培養(yǎng)物.

  6.13 帶有菌液的吸管,試管,培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒,24小時(shí)后取出沖洗.

  6.14 如有菌液灑在桌上或地上,應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3％的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘,再做處理.工作衣帽等受到菌液污染時(shí),應(yīng)立即脫去,高壓蒸汽滅菌后洗滌.

  6.15 凡帶有活菌的物品,必須經(jīng)消毒后,才能在水龍頭下沖洗,嚴(yán)禁污染下水道.

  6.16 無菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù).在超凈工作臺(tái)開啟的狀態(tài)下,取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干,無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml,放至凝固后,倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),證明無菌后,取平板3～5個(gè),分別放置工作位置的左中右等處,開蓋暴露30分鐘后,倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí),取出檢查.100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個(gè)菌落,10000級(jí)潔凈室平均不得超過3個(gè)菌落.如超過限度,應(yīng)對無菌室進(jìn)行徹底消毒,直至重復(fù)檢查合乎要求為止.

7、參照《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》中(無菌檢查法)章節(jié)

    中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T0188.6-1995《藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程》

 

8、分發(fā)部門:質(zhì)量管理部

無菌室技術(shù)指導(dǎo)說明:

    在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后,我們還要保持無菌狀態(tài),才能對某種特定的已知微生物進(jìn)行研究或利用它們的功能,否則外界的各種微生物很容易混入.外界不相干的微生物混入的現(xiàn)象,在微生物學(xué)中我們叫做污染雜菌.防止污染是微生物學(xué)工作中十分關(guān)鍵的技術(shù).一方面是徹底滅菌,另一方面防止污染,是無菌技術(shù)的兩個(gè)方面.另外,我們還要防止所研究的微生物,特別是致病微生物或經(jīng)過基因工程改造了的本來自然界不存在的微生物從我們的實(shí)驗(yàn)容器中逃逸到外界環(huán)境中去.為了這些目的,在微生物學(xué)中,有許多措施.

    無菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間.可以用板材和玻璃建造.面積不宜過大,約4—5平方米即可,高2.5米左右.無菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間,緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向,以免氣流帶進(jìn)雜菌.無菌室和緩沖間都必須密閉.室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置.無菌室內(nèi)的地面、墻壁必須平整,不易藏污納垢,便于清洗.工作臺(tái)的臺(tái)面應(yīng)該處于水平狀態(tài).無菌室和緩沖間都裝有紫外線燈,無菌室的紫外線燈距離工作臺(tái)面1米.工作人員進(jìn)入無菌室應(yīng)穿滅過菌的服裝,戴帽子.

   當(dāng)前無菌室多存在于微生物工廠,一般實(shí)驗(yàn)室則使用超凈臺(tái).超凈臺(tái)其主要功能是利用空氣層流裝置排除工作臺(tái)面上部包括微生物在內(nèi)的各種微小塵埃.通過電動(dòng)裝置使空氣通過高效過濾器具后進(jìn)入工作臺(tái)面,使臺(tái)面始終保持在流動(dòng)無菌空氣控制之下.而且在接近外部的一方有一道高速流動(dòng)的氣簾防止外部帶菌空氣進(jìn)入.

    在條件較困難的地方,也可以用木制無菌箱代替超凈臺(tái).無菌箱結(jié)構(gòu)簡單,便于移動(dòng),箱正面開有兩個(gè)洞,不操作時(shí)用推拉式小門擋住,操作時(shí)可以將雙臂伸進(jìn)去.正面上部裝有玻璃,便于在內(nèi)部操作,箱內(nèi)部裝有紫外線燈,從側(cè)面小門可以放進(jìn)去器具和菌種等.

    無菌操作技術(shù)當(dāng)前不僅在微生物學(xué)研究和應(yīng)用上起著舉足輕重的作用,而且在許多生物技術(shù)中也被廣泛應(yīng)用.例如轉(zhuǎn)基因技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)等.