霉菌毒素是次生性的真菌代謝物,全世界極為關注。據(jù)估計,全世界供應的谷物中有25%受到霉菌毒素污染。 有幾種方法一直被用來對收霉菌毒素污染的飼料進行脫毒或滅活處理,但是其作用極不穩(wěn)定,或者不實用。
一、霉菌對飼料的危害 自從1960年英國火雞X-病爆發(fā),世界開始注重對毒素中毒的徹底調(diào)查。已知有300多種真菌產(chǎn)生毒素, 但除幾種毒素外,人們對它們產(chǎn)生的毒素所知甚少。已知的重要的毒素有:黃曲霉素、赭曲霉毒素、 桔霉素和玉米赤霉烯酮。這些有霉菌分布各異,都已從范圍廣泛的各種谷物及混合飼料中分離。 真菌生長: 曲霉屬菌屬曲霉科,大多數(shù)真菌污染事件都發(fā)生在操作不當?shù)氖斋@、運輸、飼料原料和混合飼料儲藏過程中。 飼料水分含量12%或以上,相對濕度80~90%和溫度在10~42℃都足以使真菌生長。而霉菌對飼料造成嚴重 的危害。微生物活動是導致貯藏飼料霉變的主要原因,微生物個體極小,在其未大量繁殖前,常不易被發(fā)現(xiàn)。 當發(fā)現(xiàn)霉變顏色時,說明微生物繁殖已處于旺盛階段,飼料品質已受到嚴重破壞。
1、造成大量的營養(yǎng)物質損失。
據(jù)研究,導致飼料霉變的孢霉菌,屬一種腐生微生物。該微生物自身不僅不制造營養(yǎng), 而且常可通過分泌多種酶分解飼料養(yǎng)分,供其生長繁殖。因此,凡被霉菌污染的飼料,營養(yǎng)物質含量大大降低, 并散發(fā)一股難聞的霉味。聯(lián)合國糧農(nóng)組織調(diào)查,全世界每年被真菌污染的各類谷物、油料種子和飼料,約占其總量 的10%左右?梢姡咕怯绊懭澜甾r(nóng)業(yè)、飼料業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的一大危害,必須預以高度重視。
2、引起發(fā)熱,使貯料發(fā)生質變。
霉菌在消耗飼料營養(yǎng)物質的同時,還釋放出熱量。料溫升高的結果,使飼料中蛋白質、 脂肪、維生素發(fā)生變化。首先使蛋白質發(fā)生質變,出現(xiàn)蛋白質溶解度降低,純蛋白減少、氨態(tài)氮增加、蛋白質利用 率和氨基酸含量下降。
3、產(chǎn)生毒素污染飼料。
在本文中重點強調(diào)霉菌毒素對谷物和飼料的污染及其可能的脫毒方法。霉菌毒素是次生性的真 菌代謝物,至今仍是全世界受到重大關注的一個領域。霉菌毒素如果有的話一般是以微量污染物的形式存在于農(nóng)產(chǎn) 品中,其濃度范圍以每克中含有多少納克到多少微克計。對霉菌毒素的大力研究以進行了將近40年。1961年分離到 了第一組霉菌毒素并對它們進行了描述。它們由黃曲霉毒素組成。這是對1960年在動物中爆發(fā)的嚴重急性病進行研 究的結果。1965年,繼黃曲霉毒素的發(fā)現(xiàn)之后又識別了另一組重要的霉菌毒素-赭毒素(Ochratoxins)。
二、霉菌毒素分類及危害 霉菌毒素中毒的典型情況一般是由于發(fā)生急性臨床癥狀。這些急性中毒有明顯的表現(xiàn)并能造成經(jīng)濟損失,但是更 為經(jīng)常的是難以發(fā)現(xiàn)的隱性中毒。急性中毒在生物學和經(jīng)濟上造成的后果比隱性中毒小得多。較低劑量霉菌毒素引起 的一般性生產(chǎn)性能和免疫狀態(tài)受抑就是一個例子。這種情況是特別應該注意的,因為聯(lián)合國糧農(nóng)組織估計全世界谷物 供應的25%受霉菌毒素污染。動物試驗表明,霉菌毒素能引起心率減慢、呼吸加快、脫毛和流產(chǎn)等癥狀。在霉菌毒素 方面,主要有曲霉菌、青霉菌和鐮刀霉菌污染飼料。據(jù)報道,對湖南省6個地區(qū)幾十家飼料廠和養(yǎng)殖場共121份畜禽配 合飼料的測定,黃曲霉、白曲霉、寄生曲霉和黑曲霉的檢出率分別為76.2%,55.4%,49.6%和20.6%。對玉米、米糠、豆 粕、魚粉、菜粕和棉籽粕的66個樣品的測定,霉菌污染率為89.4%. 真菌產(chǎn)生霉菌毒素的主要地方可以是田間(“田間毒素”,如鐮刀毒素),也可以是倉庫(“倉儲毒素”,如黃 曲霉毒素和赭毒素),或者在這兩個地方都產(chǎn)生。在作物或飼料上是否有霉菌毒素取決于諸多因素,如:作物類型、 作物的易感性、所附真菌的類型、昆蟲或機械造成的損害、收獲時否進行過滅菌處理、儲存條件以及隨后的任何處理。 下面將簡要討論最重要的霉菌毒素,如果可能,再附上有關耐受性和法規(guī)方面的資料。 Hesseltine(1986)按霉菌毒素(及它們的主要靶部位)在全世界的相對重要性排序如下: 黃曲霉毒素(肝毒素) 赭毒素(腎毒素) 毛菌素(皮膚毒素) 玉米赤霉烯酮(雌激素) 去氧瓜萎鐮菌醇(皮膚毒素)。 天然產(chǎn)生的植物毒素 除了由各種真菌產(chǎn)生的毒素外,天然產(chǎn)生的植物毒素(抗營養(yǎng)因子)也與動物營養(yǎng)有關。某些重要的然而有時受到曲 解的非真菌毒素是: 葡糖異硫氰酸鹽和芥子酸,主要存在于油菜籽中。 棉酚,是一種聚酚化合物,存在于某些主要是棉屬的籽實中。 羽扇豆生物堿,新的羽扇豆品種的總生物堿含量一般低于0.03%. 黃曲霉毒素 在各類毒素中,黃曲霉素類被認為是毒性最大,因為它們可引起肝中毒、突變、癌變和免疫抑制等。沒有其它毒素有 象黃曲霉素這樣如此廣泛的毒性,因此世界對它的認識也比較多,黃曲霉素是真菌、曲霉屬菌、 黃曲霉等的產(chǎn)物。它 們產(chǎn)生黃曲霉素B1、B2、G1、M1、M2。其中B1的毒性最大。黃曲霉毒素是一組極毒的化學物質,主要由黃曲霉 (Aspergillus flavus) 寄生曲霉 (A.parasiticus) 產(chǎn)生。這些曲霉在全世界的空氣和土壤中廣為分布,死的和活的動植物都 能感染。在熱帶和亞熱帶地區(qū),食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高。那里的濕熱氣候為真菌生長提供了最佳的 條件。例如,對黃曲霉的最佳溫度是28-30℃,花生中的最低水分含量正好是8-10%。在很多受污染的農(nóng)產(chǎn)品中, 花生、棉籽和大米是最容易被產(chǎn)生黃曲霉毒素的霉菌所感染的。由于黃曲霉素廣泛出現(xiàn),它們對畜牧生產(chǎn)造成嚴重的 經(jīng)濟損失。例如,據(jù)估計,1986年僅僅由于肉仔雞吃了被黃曲霉毒素污染的飼料而體重減輕所造成的直接經(jīng)濟損失約 為1億4000萬美元。大量文獻報道,黃曲霉可引起肝中毒,但也影響個體的全部系統(tǒng),引起宏觀和組織學方面的變化, 影響生長和生產(chǎn)率,并最終引起死亡率上升。另外,除為誘變劑和致癌劑外,黃曲霉也可影響免疫系統(tǒng),引起禽對許 多傳染性疾病易感性增加。慢性中毒情況下,除生產(chǎn)力稍有下降外,臨床癥狀不很明顯,因此不易診斷。 鑒于黃曲霉毒素是一種重要的有害飼料污染物,已經(jīng)制訂了限制其在飼料和食品中最高含量的嚴格的管理條例。比如, 按美國食品和藥物管理局規(guī)定(1988),玉米中黃曲霉毒素的最高含量為20微克/公斤、(對人和奶牛)、 100微克/公斤(對家禽)、200微克/公斤(對育肥豬)和300微克/公斤(對肉牛)。歐盟規(guī)定從1999年1月1日開始農(nóng)產(chǎn) 品中黃曲霉毒素的最高含量一般為4微克/公斤,而黃曲霉毒素B1(毒性最大的化合物)的最高含量為2微克/公斤。
* 赭毒素
赭毒素是溫暖地區(qū)最重要的倉貯毒素。在熱帶和亞熱帶地區(qū),赭毒素A主要由曲霉屬產(chǎn)生,在溫暖地區(qū)則主要由青霉 屬產(chǎn)生,尤其是Penicillium viridicatum.P.viridicatum甚至能在最低溫度為4℃、小麥的在低水分含量為18.5%的條件下產(chǎn) 生赭毒素A(OA)這種最普遍的衍生物。當達不到上述條件時,真菌也能生長但不產(chǎn)生毒素。 在德國和瑞典隨機抽取得人奶樣本中甚至也可檢測到OA。人攝入OA的主要來源是谷物及其制品。最近在丹麥進行的 大規(guī)模調(diào)查中分析了1431個小麥、大麥、黑麥、燕麥和麩皮樣本,結果顯示40%的樣本被OA污染。在所分析的產(chǎn)品中, 麩皮的OA污染程度高于谷物的籽粒部分。例如,62%的小麥麩皮樣本中檢測到了OA,而檢測到OA的小麥籽粒樣本只 有30%。多數(shù)霉菌毒素都有這種情況,即谷物副產(chǎn)品(特別是麩皮)中的霉菌毒素含量要高于整粒谷物。 谷物中產(chǎn)生OA主要是在收獲后的最初一段時間,這時水分的活性還沒有因干燥而減弱。所以預防OA的最重要辦法是 確保良好的農(nóng)業(yè)操作,阻止真菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和農(nóng)產(chǎn)品處理過程中開始生長并產(chǎn)生毒素。赭毒素A是致癌很強的一種毒素。 據(jù)報道,每公斤飼料中含有0.2~0.3毫克赭毒素A就能使豬雞中毒。反芻動物的易感性要小得多,因為其瘤胃中的微生物 會將毒素降解。世界衛(wèi)生組織建議(1991),每公斤谷物及其產(chǎn)品中的一般最高限量是5微克。有些國家(包括丹麥和 瑞典)也把這作為法定的最高限量。
* 鐮刀菌毒素
據(jù)發(fā)現(xiàn),在所有谷物上都有DON,這是一種毛菌素。受影響最大的似乎是小麥。豬在進食了每公斤含量超過0.7毫克 DON的飼料后所表現(xiàn)的主要癥狀是拒食,但很少觀察到嘔吐。每公斤飼料即使只含有0.25毫克DON也能出現(xiàn)毒性作用, 豬是最敏感的動物。美國食品和藥物管理局獸醫(yī)中心最近為動物飼料規(guī)定的限量是4毫克每公斤,條件是此飼料在豬或 寵物日糧中的用量不超過10%,在其它動物飼料中的用量不超過50%。 玉米赤霉烯酮是主要發(fā)生在玉米上的一種霉菌毒素,其主要作用類似于雌激素,據(jù)測定能引起豬的繁殖問題。日糧中 的濃度為1毫克每公斤時就能引起這種作用。據(jù)認定,每公斤體重每天攝入60微克玉米赤霉烯酮能對豬的繁殖性能產(chǎn)生 觀察不到的負面作用。美國食品和藥物管理局獸醫(yī)中心尚未規(guī)定飼料中玉米赤霉烯酮的作用水平。
* 腐馬毒素: 腐馬毒素是最近在南非發(fā)現(xiàn)的一組霉菌毒素,因此未在前面列出。腐馬毒素是由鐮刀菌屬的Fusarium moniliforme和 F.porliferatum所產(chǎn)生。最新的文獻指出,腐馬毒素是無處不在地毒素,特別是在玉米及其制品中。腐馬毒素中最毒的 成分是腐馬毒素B1,最敏感的動物是馬。腐馬毒素能引起嚴重的有害作用,如馬科動物的腦白質軟化癥和豬的肺水腫。 目前,對這一組霉菌毒素正在加強研究,尤其是在美國。有地區(qū)性意義的其它霉菌毒素是鏈格孢毒素(Alernaria toxins) 和麥角生物堿。鏈格孢毒素是由鏈格孢屬產(chǎn)生,這些是使很多水果和蔬菜在收獲后發(fā)生腐敗的微生物。麥角生物堿雖 然已不常見,但仍在谷物制品中出現(xiàn),特別是在發(fā)展中國家。 三、分析和脫毒 最近幾年,關于霉菌毒素產(chǎn)生、作用機制和它們對畜禽生產(chǎn)影響的資料積累了很多。眼前的需要是懂得如何在畜 禽日糧中利用霉菌毒素污染的飼料。許多毒素有熱穩(wěn)定性,能在制粒和其它加工過程中生存下來。許多毒素沒有抗原 性。除黃曲霉素外,有關這些毒素的病理、臨床影響、急慢性毒性效應及診斷知識都還有限。霉菌毒素安全限就黃曲 霉的毒性效應安全限而言,是各持異議。各種建議“安全水平”從20ppb到2000ppb。這一廣泛范圍存在的原因之一是許 多研究僅以死亡作為安全界限的標準。然而,家禽養(yǎng)殖不能僅僅使雞活著,而是需要雞產(chǎn)肉或蛋。歐共體將20ppb列為 顯著水平。這一限制由兩個定義較好的參數(shù)限制。允許的黃曲霉素水平不應該:
(1)影響動物健康和生產(chǎn);
(2)高到 足以通過動物產(chǎn)品進入人類食物鏈。僅僅分析單一霉毒素的安全性,可大大低估畜禽及人類面臨的真正的危險性。遺 傳變異、動物營養(yǎng)狀況、環(huán)境應激、年齡和性別等許多因素都可影響黃曲霉素毒素。因此,作為一種概念,安全性常 常是根據(jù)個人有限的經(jīng)驗。有人強調(diào)不可能有安全水平的毒素,因為甚至是很少的劑量也可能被證明在長時期可能被 證明在長時期可引起癌變。
1、分析 多數(shù)霉菌毒素可用高壓液相色譜(HLPC)進行定量分析。可惜多數(shù)飼料廠和食品廠不能進行這種分析。最近,很多 文獻報道了用微柱篩選或酶聯(lián)免疫法進行半定量快速分析。雖然在解釋這種測試結果時采用一定的謹慎態(tài)度,尤其是如 果用來測試復雜的樣本,但是這些測試方法仍可以為預報某些霉菌毒素的存在提供好的依據(jù)。
2、去污染技術 據(jù)估計,霉菌毒素可影響世界上40%的食品作物,并在代謝過程中產(chǎn)生毒素。作物上有可產(chǎn)生毒素的真菌不意味著 已被毒素感染,但只要毒素真菌存在,就意味著潛在的災害性。而且,霉菌或毒素很少是單獨存在的,兩種或多種毒素 加起來的毒性可能比任何單一毒素的毒性都大。殺死這些真菌可阻止毒素的繼續(xù)產(chǎn)生,但不能除掉以產(chǎn)生的毒素。因此 處理受污染飼料最大的挑戰(zhàn)就是快速確定毒素類型和濃度。防止毒素致病的主要方法就是采用飼料添加劑和各種酶。
3、防治措施 很多霉菌毒素的毒性水平只在一定的環(huán)境條件下才形成。因此,應該盡可能防止真菌的生長和產(chǎn)生霉菌毒素以盡量 減少這些毒素的有害作用。但是,有些環(huán)境條件是難以控制的,如:1998年歐洲的夏季潮濕而陰冷,田間真菌的生長大 大增加,導致谷物受到嚴重的鐮刀菌毒素污染。所以,可能用來對食品和原材料進行脫毒以確保食品供應安全的方法正 在受到廣泛的討論。有許多辦法一直在被用來對霉菌毒素污染的飼料進行脫毒或滅活,如物理分離、熱滅活、輻射、 微生物降解以及用各種化學藥品進行處理。在被用來試驗其對霉菌毒素降解和滅活能力的化學品中包括多種酸、堿、 硫酸氫鹽、氧化性制劑和氣體,還有青貯。除了氨化處理外,多數(shù)方法是不實用、無效、昂貴或有潛在危險的。即使對 于氨化處理,主管單位和研究部門也意見不一。例如,在美國只有亞里桑那州、加利福尼亞州和得克薩斯州允許對受黃 曲霉素污染的棉籽粕產(chǎn)品進行氨化處理。得克薩斯州還允許對受黃曲霉毒素污染的玉米做氨化處理。然而,食品和藥物 管理局禁止將黃曲霉毒素污染但經(jīng)過氨化處理的棉籽或玉米進行任何地州際運輸,原因是對氨化反應產(chǎn)物的安全性尚缺 乏證據(jù)。
總之,目前還沒有辦法對霉菌毒素污染的飼料進行安全而廉價的脫毒處理。第一種去污染的努力就是用液體抽 提法,如有機溶劑、氯化鈣或碳酸氫鈉水溶液或鹽水。氨處理和一甲胺及氫氧化鈣也可能有效。在濕度較高的條件下, 高熱或高熱高壓也可破壞毒素。然而這一處理因毒素類型、加熱時間、溫度及飼料谷物中的水含量不同而效果不同。有 些毒素,如黃曲霉素、單端孢烯、玉米赤霉素、氯霉素、棒曲霉素等是高度穩(wěn)定的,而常常在小麥和黑麥中存在的麥角 生物堿和桔霉素則很容易破壞。紫外線和等離子發(fā)射也對破壞黃曲霉等毒素有效,但它們同時也破壞飼料成份中的營養(yǎng) 因子。去黃曲霉素的氨處理是實踐中最常用、最有效的辦法。
4、使用飼料添加劑 在防止飼料污染處理中常常碰到一些實際困難,考慮到成本和所耗費的時間,注意力逐漸集中到在飼料中添加飼料 添加劑。這些飼料添加劑可在體內(nèi)對抗霉菌毒素。有一些礦物元素復合體可被機體吸收和消化,而對機體無害。這些復 合體通常被稱為飼料添加劑。例如,活性碳、酵母細胞壁產(chǎn)品和膨潤土、海泡石鈉等礦物粘土就在不同程度上有這種能 力。通過往飼料中加入吸附物質而減少霉菌毒素從胃腸道中的吸收。試驗過的物質有木炭、沸石、膨潤土、某些粘土和 膽安息胺(cholestyramine)。雖然在科學研究中取得了一定的正效果,但是在關于使用這些物質的討論中也存在巨大的 意見分歧。比如,Kubena等人的研究組發(fā)現(xiàn),幾種吸附劑使豬雞免受黃曲霉菌毒素危害的保護范圍是0~75%。正如前 面所述,目前尚沒有安全而效力穩(wěn)定的解霉菌毒素飼料添加劑。一些使用中的合成產(chǎn)品有沸石、硅釩土和噶瑪氨基丁酸 (GABA)。沸石對抗黃曲霉素、T-2毒素和嘔吐霉素有效,但它的作用是非特異性的,且通常與許多毒素的結合都不完 全。在每公斤感染B1黃曲霉素1毫克的飼料中添加2%沸石,可降低動物肝臟中的毒素水平30~40%。在混合飼料中添加 0.20%的蛋氨酸可顯著降低沸石的效果。這也可能是醫(yī)藥可降低毒素結合能力的一種可能性。 畜禽機體在吸收分解毒素的同時,也就降低了機體的能量交換率。在飼料中添加一些添加劑可使能量交換正;。 例如,在毒素濃度較低情況下,添加GABA或其類似物或瑚珀酸,可防止生產(chǎn)力下降,促使能量轉換正常化;如果毒素 攝入濃度較高,這些添加劑就會減弱毒素影響。在每公斤含1毫克黃曲霉飼料中添加GABA可非常好地防止毒素效應,但 不能完全消除每公斤2毫克黃曲霉飼料中的抗毒素的影響。在飼料中添加硅鋁土也可有效吸收黃曲霉素,并可一定程度 地吸收玉米赤霉烯酮和單端孢霉毒素。霉菌毒素在結構和物理特性上有很大差異。例如,僅毛菌素這一家族就由100多 種衍生物組成。所以顯然不可能制定一種能夠通用于幾種不同霉菌毒素的方法。再說,動物飼料是復雜的基質,可能含 有許多干擾物質。還有證據(jù)表明,某些吸附劑可能對重要的營養(yǎng)素有負面作用。關于為何黃曲霉素被黏結的效率比其它 真菌毒素高得多,首先可以比較以下它們的分子結構。這些化合物的分子結構很不一樣。根據(jù)觀察,黃曲霉素有兩點不 同于其它真菌毒素:
(1)它有相對較強的剛性且?guī)缀醭势媾帕械脑咏Y構;
(2)它是唯一含有1,3-雙酮結構的分子。盡管脫氧瓜蔞鐮菌醇和T-2毒素也具有相對剛性的分子結構,其分子的杯 狀構造使其無緣具有同面性。玉米赤霉烯酮的部分結構具有同面性( 即它們的酚環(huán) ),但這些分子的其它部分非 !八沙凇。串珠鐮孢菌毒素完全不具備剛性,盡管它具有部分可能與粘土表面進行相當強烈反應的極性結構。
5、補充蛋氨酸 被吸收進血液的霉菌毒素由肝臟負責解毒。肝臟中黃曲霉素解毒作用的生物學降解、氧化反應是以谷胱甘肽為基礎 的。谷胱甘肽的部分組成就是蛋氨酸和胱氨酸。因此,這一過程將消耗蛋氨酸,影響生長和生產(chǎn)性能。故當飼料受黃曲 霉素污染影響時,也推薦加入更多的蛋氨酸。
6、酶的使用 去霉菌毒素的新技術進展包括用酶幫助分解毒素,F(xiàn)有的知識認為大多數(shù)霉菌毒素都可以通過肝中的微粒體氧化作 用進行生物學轉化,因此人們利用一些增強霉菌毒素代謝(單加氧酶誘導物〕的酶。這些酶把毒素降解為無毒的代謝物。 這些代謝物低毒,且易從機體中排出,從而降低肝中的毒素濃度和毒素毒性。 一些酶可使玉米赤霉烯酮、T-2毒素、脫氧雪腐鐮孢烯醇等失活。內(nèi)脂酶可斷裂玉米赤霉烯酮的內(nèi)脂環(huán),而環(huán)氧化 酶降解單端孢酶毒素12、13環(huán)氧組。通過分裂霉菌毒素的功能性原子組,酶把這些毒素降解成非毒性的代謝物。非毒性 的代謝物可被消化排出,而不引起副作用。
總而言之,我們?nèi)祟愊M不希望的常常不能扔掉,畜禽日糧還得用。黃曲霉素污染日糧的風險控制是近來解決這一 問題最重要的方法之一。有許多技術可降低毒性;
* 建立霉菌毒素監(jiān)測計劃
* 防止霉菌感染的第一道防線是農(nóng)田中防霉菌和毒素感染。要正確收獲、干燥和存儲谷物,消除存藏中毒素產(chǎn)生的 有利條件。
* 物理分離有害或真菌感染的谷;蚍N子是基本的一般常識。
* 如果可能,調(diào)整動物日糧,用干凈谷物稀釋含毒素谷物,提高日糧中營養(yǎng)成份含量。
* 添加抗霉劑以防止飼料的進一步感染。86230000 68482654
* 用飼料添加劑降低飼料毒性。 * 最近的一種方法是用酶。
* 添加高于NRC標準30%-40%的蛋氨酸可降低毒性效應。
四、結語
總之,最好的辦法還是通過農(nóng)業(yè)和技術手段防止真菌生長。另一種可能的辦法是對某些動物飼料的有害作用進行稀釋, 例如通過混合使最終得到的混合飼料中的某種霉菌毒素的含量低于危險水平。也可以將含有某些霉菌毒素的混合飼料用于 飼喂敏感性較小的動物,譬如用赭毒素污染的飼料飼喂反芻動物而不是單胃動物。
一、霉菌對飼料的危害 自從1960年英國火雞X-病爆發(fā),世界開始注重對毒素中毒的徹底調(diào)查。已知有300多種真菌產(chǎn)生毒素, 但除幾種毒素外,人們對它們產(chǎn)生的毒素所知甚少。已知的重要的毒素有:黃曲霉素、赭曲霉毒素、 桔霉素和玉米赤霉烯酮。這些有霉菌分布各異,都已從范圍廣泛的各種谷物及混合飼料中分離。 真菌生長: 曲霉屬菌屬曲霉科,大多數(shù)真菌污染事件都發(fā)生在操作不當?shù)氖斋@、運輸、飼料原料和混合飼料儲藏過程中。 飼料水分含量12%或以上,相對濕度80~90%和溫度在10~42℃都足以使真菌生長。而霉菌對飼料造成嚴重 的危害。微生物活動是導致貯藏飼料霉變的主要原因,微生物個體極小,在其未大量繁殖前,常不易被發(fā)現(xiàn)。 當發(fā)現(xiàn)霉變顏色時,說明微生物繁殖已處于旺盛階段,飼料品質已受到嚴重破壞。
1、造成大量的營養(yǎng)物質損失。
據(jù)研究,導致飼料霉變的孢霉菌,屬一種腐生微生物。該微生物自身不僅不制造營養(yǎng), 而且常可通過分泌多種酶分解飼料養(yǎng)分,供其生長繁殖。因此,凡被霉菌污染的飼料,營養(yǎng)物質含量大大降低, 并散發(fā)一股難聞的霉味。聯(lián)合國糧農(nóng)組織調(diào)查,全世界每年被真菌污染的各類谷物、油料種子和飼料,約占其總量 的10%左右?梢姡咕怯绊懭澜甾r(nóng)業(yè)、飼料業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的一大危害,必須預以高度重視。
2、引起發(fā)熱,使貯料發(fā)生質變。
霉菌在消耗飼料營養(yǎng)物質的同時,還釋放出熱量。料溫升高的結果,使飼料中蛋白質、 脂肪、維生素發(fā)生變化。首先使蛋白質發(fā)生質變,出現(xiàn)蛋白質溶解度降低,純蛋白減少、氨態(tài)氮增加、蛋白質利用 率和氨基酸含量下降。
3、產(chǎn)生毒素污染飼料。
在本文中重點強調(diào)霉菌毒素對谷物和飼料的污染及其可能的脫毒方法。霉菌毒素是次生性的真 菌代謝物,至今仍是全世界受到重大關注的一個領域。霉菌毒素如果有的話一般是以微量污染物的形式存在于農(nóng)產(chǎn) 品中,其濃度范圍以每克中含有多少納克到多少微克計。對霉菌毒素的大力研究以進行了將近40年。1961年分離到 了第一組霉菌毒素并對它們進行了描述。它們由黃曲霉毒素組成。這是對1960年在動物中爆發(fā)的嚴重急性病進行研 究的結果。1965年,繼黃曲霉毒素的發(fā)現(xiàn)之后又識別了另一組重要的霉菌毒素-赭毒素(Ochratoxins)。
二、霉菌毒素分類及危害 霉菌毒素中毒的典型情況一般是由于發(fā)生急性臨床癥狀。這些急性中毒有明顯的表現(xiàn)并能造成經(jīng)濟損失,但是更 為經(jīng)常的是難以發(fā)現(xiàn)的隱性中毒。急性中毒在生物學和經(jīng)濟上造成的后果比隱性中毒小得多。較低劑量霉菌毒素引起 的一般性生產(chǎn)性能和免疫狀態(tài)受抑就是一個例子。這種情況是特別應該注意的,因為聯(lián)合國糧農(nóng)組織估計全世界谷物 供應的25%受霉菌毒素污染。動物試驗表明,霉菌毒素能引起心率減慢、呼吸加快、脫毛和流產(chǎn)等癥狀。在霉菌毒素 方面,主要有曲霉菌、青霉菌和鐮刀霉菌污染飼料。據(jù)報道,對湖南省6個地區(qū)幾十家飼料廠和養(yǎng)殖場共121份畜禽配 合飼料的測定,黃曲霉、白曲霉、寄生曲霉和黑曲霉的檢出率分別為76.2%,55.4%,49.6%和20.6%。對玉米、米糠、豆 粕、魚粉、菜粕和棉籽粕的66個樣品的測定,霉菌污染率為89.4%. 真菌產(chǎn)生霉菌毒素的主要地方可以是田間(“田間毒素”,如鐮刀毒素),也可以是倉庫(“倉儲毒素”,如黃 曲霉毒素和赭毒素),或者在這兩個地方都產(chǎn)生。在作物或飼料上是否有霉菌毒素取決于諸多因素,如:作物類型、 作物的易感性、所附真菌的類型、昆蟲或機械造成的損害、收獲時否進行過滅菌處理、儲存條件以及隨后的任何處理。 下面將簡要討論最重要的霉菌毒素,如果可能,再附上有關耐受性和法規(guī)方面的資料。 Hesseltine(1986)按霉菌毒素(及它們的主要靶部位)在全世界的相對重要性排序如下: 黃曲霉毒素(肝毒素) 赭毒素(腎毒素) 毛菌素(皮膚毒素) 玉米赤霉烯酮(雌激素) 去氧瓜萎鐮菌醇(皮膚毒素)。 天然產(chǎn)生的植物毒素 除了由各種真菌產(chǎn)生的毒素外,天然產(chǎn)生的植物毒素(抗營養(yǎng)因子)也與動物營養(yǎng)有關。某些重要的然而有時受到曲 解的非真菌毒素是: 葡糖異硫氰酸鹽和芥子酸,主要存在于油菜籽中。 棉酚,是一種聚酚化合物,存在于某些主要是棉屬的籽實中。 羽扇豆生物堿,新的羽扇豆品種的總生物堿含量一般低于0.03%. 黃曲霉毒素 在各類毒素中,黃曲霉素類被認為是毒性最大,因為它們可引起肝中毒、突變、癌變和免疫抑制等。沒有其它毒素有 象黃曲霉素這樣如此廣泛的毒性,因此世界對它的認識也比較多,黃曲霉素是真菌、曲霉屬菌、 黃曲霉等的產(chǎn)物。它 們產(chǎn)生黃曲霉素B1、B2、G1、M1、M2。其中B1的毒性最大。黃曲霉毒素是一組極毒的化學物質,主要由黃曲霉 (Aspergillus flavus) 寄生曲霉 (A.parasiticus) 產(chǎn)生。這些曲霉在全世界的空氣和土壤中廣為分布,死的和活的動植物都 能感染。在熱帶和亞熱帶地區(qū),食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高。那里的濕熱氣候為真菌生長提供了最佳的 條件。例如,對黃曲霉的最佳溫度是28-30℃,花生中的最低水分含量正好是8-10%。在很多受污染的農(nóng)產(chǎn)品中, 花生、棉籽和大米是最容易被產(chǎn)生黃曲霉毒素的霉菌所感染的。由于黃曲霉素廣泛出現(xiàn),它們對畜牧生產(chǎn)造成嚴重的 經(jīng)濟損失。例如,據(jù)估計,1986年僅僅由于肉仔雞吃了被黃曲霉毒素污染的飼料而體重減輕所造成的直接經(jīng)濟損失約 為1億4000萬美元。大量文獻報道,黃曲霉可引起肝中毒,但也影響個體的全部系統(tǒng),引起宏觀和組織學方面的變化, 影響生長和生產(chǎn)率,并最終引起死亡率上升。另外,除為誘變劑和致癌劑外,黃曲霉也可影響免疫系統(tǒng),引起禽對許 多傳染性疾病易感性增加。慢性中毒情況下,除生產(chǎn)力稍有下降外,臨床癥狀不很明顯,因此不易診斷。 鑒于黃曲霉毒素是一種重要的有害飼料污染物,已經(jīng)制訂了限制其在飼料和食品中最高含量的嚴格的管理條例。比如, 按美國食品和藥物管理局規(guī)定(1988),玉米中黃曲霉毒素的最高含量為20微克/公斤、(對人和奶牛)、 100微克/公斤(對家禽)、200微克/公斤(對育肥豬)和300微克/公斤(對肉牛)。歐盟規(guī)定從1999年1月1日開始農(nóng)產(chǎn) 品中黃曲霉毒素的最高含量一般為4微克/公斤,而黃曲霉毒素B1(毒性最大的化合物)的最高含量為2微克/公斤。
* 赭毒素
赭毒素是溫暖地區(qū)最重要的倉貯毒素。在熱帶和亞熱帶地區(qū),赭毒素A主要由曲霉屬產(chǎn)生,在溫暖地區(qū)則主要由青霉 屬產(chǎn)生,尤其是Penicillium viridicatum.P.viridicatum甚至能在最低溫度為4℃、小麥的在低水分含量為18.5%的條件下產(chǎn) 生赭毒素A(OA)這種最普遍的衍生物。當達不到上述條件時,真菌也能生長但不產(chǎn)生毒素。 在德國和瑞典隨機抽取得人奶樣本中甚至也可檢測到OA。人攝入OA的主要來源是谷物及其制品。最近在丹麥進行的 大規(guī)模調(diào)查中分析了1431個小麥、大麥、黑麥、燕麥和麩皮樣本,結果顯示40%的樣本被OA污染。在所分析的產(chǎn)品中, 麩皮的OA污染程度高于谷物的籽粒部分。例如,62%的小麥麩皮樣本中檢測到了OA,而檢測到OA的小麥籽粒樣本只 有30%。多數(shù)霉菌毒素都有這種情況,即谷物副產(chǎn)品(特別是麩皮)中的霉菌毒素含量要高于整粒谷物。 谷物中產(chǎn)生OA主要是在收獲后的最初一段時間,這時水分的活性還沒有因干燥而減弱。所以預防OA的最重要辦法是 確保良好的農(nóng)業(yè)操作,阻止真菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和農(nóng)產(chǎn)品處理過程中開始生長并產(chǎn)生毒素。赭毒素A是致癌很強的一種毒素。 據(jù)報道,每公斤飼料中含有0.2~0.3毫克赭毒素A就能使豬雞中毒。反芻動物的易感性要小得多,因為其瘤胃中的微生物 會將毒素降解。世界衛(wèi)生組織建議(1991),每公斤谷物及其產(chǎn)品中的一般最高限量是5微克。有些國家(包括丹麥和 瑞典)也把這作為法定的最高限量。
* 鐮刀菌毒素
據(jù)發(fā)現(xiàn),在所有谷物上都有DON,這是一種毛菌素。受影響最大的似乎是小麥。豬在進食了每公斤含量超過0.7毫克 DON的飼料后所表現(xiàn)的主要癥狀是拒食,但很少觀察到嘔吐。每公斤飼料即使只含有0.25毫克DON也能出現(xiàn)毒性作用, 豬是最敏感的動物。美國食品和藥物管理局獸醫(yī)中心最近為動物飼料規(guī)定的限量是4毫克每公斤,條件是此飼料在豬或 寵物日糧中的用量不超過10%,在其它動物飼料中的用量不超過50%。 玉米赤霉烯酮是主要發(fā)生在玉米上的一種霉菌毒素,其主要作用類似于雌激素,據(jù)測定能引起豬的繁殖問題。日糧中 的濃度為1毫克每公斤時就能引起這種作用。據(jù)認定,每公斤體重每天攝入60微克玉米赤霉烯酮能對豬的繁殖性能產(chǎn)生 觀察不到的負面作用。美國食品和藥物管理局獸醫(yī)中心尚未規(guī)定飼料中玉米赤霉烯酮的作用水平。
* 腐馬毒素: 腐馬毒素是最近在南非發(fā)現(xiàn)的一組霉菌毒素,因此未在前面列出。腐馬毒素是由鐮刀菌屬的Fusarium moniliforme和 F.porliferatum所產(chǎn)生。最新的文獻指出,腐馬毒素是無處不在地毒素,特別是在玉米及其制品中。腐馬毒素中最毒的 成分是腐馬毒素B1,最敏感的動物是馬。腐馬毒素能引起嚴重的有害作用,如馬科動物的腦白質軟化癥和豬的肺水腫。 目前,對這一組霉菌毒素正在加強研究,尤其是在美國。有地區(qū)性意義的其它霉菌毒素是鏈格孢毒素(Alernaria toxins) 和麥角生物堿。鏈格孢毒素是由鏈格孢屬產(chǎn)生,這些是使很多水果和蔬菜在收獲后發(fā)生腐敗的微生物。麥角生物堿雖 然已不常見,但仍在谷物制品中出現(xiàn),特別是在發(fā)展中國家。 三、分析和脫毒 最近幾年,關于霉菌毒素產(chǎn)生、作用機制和它們對畜禽生產(chǎn)影響的資料積累了很多。眼前的需要是懂得如何在畜 禽日糧中利用霉菌毒素污染的飼料。許多毒素有熱穩(wěn)定性,能在制粒和其它加工過程中生存下來。許多毒素沒有抗原 性。除黃曲霉素外,有關這些毒素的病理、臨床影響、急慢性毒性效應及診斷知識都還有限。霉菌毒素安全限就黃曲 霉的毒性效應安全限而言,是各持異議。各種建議“安全水平”從20ppb到2000ppb。這一廣泛范圍存在的原因之一是許 多研究僅以死亡作為安全界限的標準。然而,家禽養(yǎng)殖不能僅僅使雞活著,而是需要雞產(chǎn)肉或蛋。歐共體將20ppb列為 顯著水平。這一限制由兩個定義較好的參數(shù)限制。允許的黃曲霉素水平不應該:
(1)影響動物健康和生產(chǎn);
(2)高到 足以通過動物產(chǎn)品進入人類食物鏈。僅僅分析單一霉毒素的安全性,可大大低估畜禽及人類面臨的真正的危險性。遺 傳變異、動物營養(yǎng)狀況、環(huán)境應激、年齡和性別等許多因素都可影響黃曲霉素毒素。因此,作為一種概念,安全性常 常是根據(jù)個人有限的經(jīng)驗。有人強調(diào)不可能有安全水平的毒素,因為甚至是很少的劑量也可能被證明在長時期可能被 證明在長時期可引起癌變。
1、分析 多數(shù)霉菌毒素可用高壓液相色譜(HLPC)進行定量分析。可惜多數(shù)飼料廠和食品廠不能進行這種分析。最近,很多 文獻報道了用微柱篩選或酶聯(lián)免疫法進行半定量快速分析。雖然在解釋這種測試結果時采用一定的謹慎態(tài)度,尤其是如 果用來測試復雜的樣本,但是這些測試方法仍可以為預報某些霉菌毒素的存在提供好的依據(jù)。
2、去污染技術 據(jù)估計,霉菌毒素可影響世界上40%的食品作物,并在代謝過程中產(chǎn)生毒素。作物上有可產(chǎn)生毒素的真菌不意味著 已被毒素感染,但只要毒素真菌存在,就意味著潛在的災害性。而且,霉菌或毒素很少是單獨存在的,兩種或多種毒素 加起來的毒性可能比任何單一毒素的毒性都大。殺死這些真菌可阻止毒素的繼續(xù)產(chǎn)生,但不能除掉以產(chǎn)生的毒素。因此 處理受污染飼料最大的挑戰(zhàn)就是快速確定毒素類型和濃度。防止毒素致病的主要方法就是采用飼料添加劑和各種酶。
3、防治措施 很多霉菌毒素的毒性水平只在一定的環(huán)境條件下才形成。因此,應該盡可能防止真菌的生長和產(chǎn)生霉菌毒素以盡量 減少這些毒素的有害作用。但是,有些環(huán)境條件是難以控制的,如:1998年歐洲的夏季潮濕而陰冷,田間真菌的生長大 大增加,導致谷物受到嚴重的鐮刀菌毒素污染。所以,可能用來對食品和原材料進行脫毒以確保食品供應安全的方法正 在受到廣泛的討論。有許多辦法一直在被用來對霉菌毒素污染的飼料進行脫毒或滅活,如物理分離、熱滅活、輻射、 微生物降解以及用各種化學藥品進行處理。在被用來試驗其對霉菌毒素降解和滅活能力的化學品中包括多種酸、堿、 硫酸氫鹽、氧化性制劑和氣體,還有青貯。除了氨化處理外,多數(shù)方法是不實用、無效、昂貴或有潛在危險的。即使對 于氨化處理,主管單位和研究部門也意見不一。例如,在美國只有亞里桑那州、加利福尼亞州和得克薩斯州允許對受黃 曲霉素污染的棉籽粕產(chǎn)品進行氨化處理。得克薩斯州還允許對受黃曲霉毒素污染的玉米做氨化處理。然而,食品和藥物 管理局禁止將黃曲霉毒素污染但經(jīng)過氨化處理的棉籽或玉米進行任何地州際運輸,原因是對氨化反應產(chǎn)物的安全性尚缺 乏證據(jù)。
總之,目前還沒有辦法對霉菌毒素污染的飼料進行安全而廉價的脫毒處理。第一種去污染的努力就是用液體抽 提法,如有機溶劑、氯化鈣或碳酸氫鈉水溶液或鹽水。氨處理和一甲胺及氫氧化鈣也可能有效。在濕度較高的條件下, 高熱或高熱高壓也可破壞毒素。然而這一處理因毒素類型、加熱時間、溫度及飼料谷物中的水含量不同而效果不同。有 些毒素,如黃曲霉素、單端孢烯、玉米赤霉素、氯霉素、棒曲霉素等是高度穩(wěn)定的,而常常在小麥和黑麥中存在的麥角 生物堿和桔霉素則很容易破壞。紫外線和等離子發(fā)射也對破壞黃曲霉等毒素有效,但它們同時也破壞飼料成份中的營養(yǎng) 因子。去黃曲霉素的氨處理是實踐中最常用、最有效的辦法。
4、使用飼料添加劑 在防止飼料污染處理中常常碰到一些實際困難,考慮到成本和所耗費的時間,注意力逐漸集中到在飼料中添加飼料 添加劑。這些飼料添加劑可在體內(nèi)對抗霉菌毒素。有一些礦物元素復合體可被機體吸收和消化,而對機體無害。這些復 合體通常被稱為飼料添加劑。例如,活性碳、酵母細胞壁產(chǎn)品和膨潤土、海泡石鈉等礦物粘土就在不同程度上有這種能 力。通過往飼料中加入吸附物質而減少霉菌毒素從胃腸道中的吸收。試驗過的物質有木炭、沸石、膨潤土、某些粘土和 膽安息胺(cholestyramine)。雖然在科學研究中取得了一定的正效果,但是在關于使用這些物質的討論中也存在巨大的 意見分歧。比如,Kubena等人的研究組發(fā)現(xiàn),幾種吸附劑使豬雞免受黃曲霉菌毒素危害的保護范圍是0~75%。正如前 面所述,目前尚沒有安全而效力穩(wěn)定的解霉菌毒素飼料添加劑。一些使用中的合成產(chǎn)品有沸石、硅釩土和噶瑪氨基丁酸 (GABA)。沸石對抗黃曲霉素、T-2毒素和嘔吐霉素有效,但它的作用是非特異性的,且通常與許多毒素的結合都不完 全。在每公斤感染B1黃曲霉素1毫克的飼料中添加2%沸石,可降低動物肝臟中的毒素水平30~40%。在混合飼料中添加 0.20%的蛋氨酸可顯著降低沸石的效果。這也可能是醫(yī)藥可降低毒素結合能力的一種可能性。 畜禽機體在吸收分解毒素的同時,也就降低了機體的能量交換率。在飼料中添加一些添加劑可使能量交換正;。 例如,在毒素濃度較低情況下,添加GABA或其類似物或瑚珀酸,可防止生產(chǎn)力下降,促使能量轉換正常化;如果毒素 攝入濃度較高,這些添加劑就會減弱毒素影響。在每公斤含1毫克黃曲霉飼料中添加GABA可非常好地防止毒素效應,但 不能完全消除每公斤2毫克黃曲霉飼料中的抗毒素的影響。在飼料中添加硅鋁土也可有效吸收黃曲霉素,并可一定程度 地吸收玉米赤霉烯酮和單端孢霉毒素。霉菌毒素在結構和物理特性上有很大差異。例如,僅毛菌素這一家族就由100多 種衍生物組成。所以顯然不可能制定一種能夠通用于幾種不同霉菌毒素的方法。再說,動物飼料是復雜的基質,可能含 有許多干擾物質。還有證據(jù)表明,某些吸附劑可能對重要的營養(yǎng)素有負面作用。關于為何黃曲霉素被黏結的效率比其它 真菌毒素高得多,首先可以比較以下它們的分子結構。這些化合物的分子結構很不一樣。根據(jù)觀察,黃曲霉素有兩點不 同于其它真菌毒素:
(1)它有相對較強的剛性且?guī)缀醭势媾帕械脑咏Y構;
(2)它是唯一含有1,3-雙酮結構的分子。盡管脫氧瓜蔞鐮菌醇和T-2毒素也具有相對剛性的分子結構,其分子的杯 狀構造使其無緣具有同面性。玉米赤霉烯酮的部分結構具有同面性( 即它們的酚環(huán) ),但這些分子的其它部分非 !八沙凇。串珠鐮孢菌毒素完全不具備剛性,盡管它具有部分可能與粘土表面進行相當強烈反應的極性結構。
5、補充蛋氨酸 被吸收進血液的霉菌毒素由肝臟負責解毒。肝臟中黃曲霉素解毒作用的生物學降解、氧化反應是以谷胱甘肽為基礎 的。谷胱甘肽的部分組成就是蛋氨酸和胱氨酸。因此,這一過程將消耗蛋氨酸,影響生長和生產(chǎn)性能。故當飼料受黃曲 霉素污染影響時,也推薦加入更多的蛋氨酸。
6、酶的使用 去霉菌毒素的新技術進展包括用酶幫助分解毒素,F(xiàn)有的知識認為大多數(shù)霉菌毒素都可以通過肝中的微粒體氧化作 用進行生物學轉化,因此人們利用一些增強霉菌毒素代謝(單加氧酶誘導物〕的酶。這些酶把毒素降解為無毒的代謝物。 這些代謝物低毒,且易從機體中排出,從而降低肝中的毒素濃度和毒素毒性。 一些酶可使玉米赤霉烯酮、T-2毒素、脫氧雪腐鐮孢烯醇等失活。內(nèi)脂酶可斷裂玉米赤霉烯酮的內(nèi)脂環(huán),而環(huán)氧化 酶降解單端孢酶毒素12、13環(huán)氧組。通過分裂霉菌毒素的功能性原子組,酶把這些毒素降解成非毒性的代謝物。非毒性 的代謝物可被消化排出,而不引起副作用。
總而言之,我們?nèi)祟愊M不希望的常常不能扔掉,畜禽日糧還得用。黃曲霉素污染日糧的風險控制是近來解決這一 問題最重要的方法之一。有許多技術可降低毒性;
* 建立霉菌毒素監(jiān)測計劃
* 防止霉菌感染的第一道防線是農(nóng)田中防霉菌和毒素感染。要正確收獲、干燥和存儲谷物,消除存藏中毒素產(chǎn)生的 有利條件。
* 物理分離有害或真菌感染的谷;蚍N子是基本的一般常識。
* 如果可能,調(diào)整動物日糧,用干凈谷物稀釋含毒素谷物,提高日糧中營養(yǎng)成份含量。
* 添加抗霉劑以防止飼料的進一步感染。86230000 68482654
* 用飼料添加劑降低飼料毒性。 * 最近的一種方法是用酶。
* 添加高于NRC標準30%-40%的蛋氨酸可降低毒性效應。
四、結語
總之,最好的辦法還是通過農(nóng)業(yè)和技術手段防止真菌生長。另一種可能的辦法是對某些動物飼料的有害作用進行稀釋, 例如通過混合使最終得到的混合飼料中的某種霉菌毒素的含量低于危險水平。也可以將含有某些霉菌毒素的混合飼料用于 飼喂敏感性較小的動物,譬如用赭毒素污染的飼料飼喂反芻動物而不是單胃動物。