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巨噬細(xì)胞培養(yǎng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
1.實(shí)驗(yàn)前三天,向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml(勿注入腸內(nèi))。
2.引頸殺死動(dòng)物,手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3~5秒。
3.置動(dòng)物于解剖臺(tái)上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側(cè),暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁。
4.再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同時(shí)從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng)。
5.用針頭輕輕挑起腹壁,使動(dòng)物體微傾向一側(cè),使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)。
6.小心拔出針頭,把液體注入離心管中,250g 4℃離心10分鐘,去上清,加10 ml Eagle培養(yǎng)基。
7.計(jì)數(shù)細(xì)胞,每只小鼠可產(chǎn)生20~30×105細(xì)胞,其中90%為巨噬細(xì)胞。
8.為獲取3×105個(gè)帖附細(xì)胞/平方厘米,需接種2.5×106/ml。
9.為純化培養(yǎng)細(xì)胞,去除其它白細(xì)胞,接種數(shù)小時(shí)后,去除培養(yǎng)液,用Eagle液沖洗1~2次后,再加新Eagle培養(yǎng)液置37℃ CO2溫箱中培養(yǎng)。
 
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