一、免疫學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
在免疫學(xué)研究中,常選用以下的幾種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:
(一)大鼠:大鼠對(duì)綿羊紅細(xì)胞和牛r球蛋白的免疫反應(yīng)有品系差異。大鼠有抗體IgE,蠕蟲(chóng)感染常能誘發(fā)大量的IgE抗體,它們存在于血液循環(huán)中,常規(guī)的免疫法只能使大鼠產(chǎn)生少量的抗體,在體內(nèi)存在的時(shí)間較短。百日咳桿菌免疫大鼠主要產(chǎn)生IgE,如在此抗原中加入福氏完全佐劑,免疫大鼠則產(chǎn)生IgGa。
(二)小鼠:小鼠的免疫球蛋白有IgM、IgA、IgE、IgG1、IgG2a和IgG2b。 小鼠很少見(jiàn)到典型的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng),也不象其它動(dòng)物那樣有規(guī)律。能誘發(fā)速發(fā)型變態(tài)反應(yīng),其全身性過(guò)敏反應(yīng)的特點(diǎn)是循環(huán)不暢,循環(huán)性虛脫,常在幾小時(shí)甚至10到 20 分鐘死亡。BALB/c小鼠常用于制備單克隆抗體。
(三)豚鼠:豚鼠中已確定的免疫球蛋白有:IgG(IgG1、IgG2)、IgA和IgE。IgG1 是變態(tài)反應(yīng)的媒介,IgG2在抗原抗體的反應(yīng)中起結(jié)合補(bǔ)體的作用。
豚鼠除作為補(bǔ)體的來(lái)源外,還被用于結(jié)核菌素的皮內(nèi)試驗(yàn)和接觸過(guò)敏物質(zhì)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的研究。豚鼠和人的結(jié)核菌素反應(yīng)差別是有無(wú)細(xì)胞浸潤(rùn),另外豚鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)在24-48h達(dá)到高峰,人在48-96h達(dá)到高峰。
(四)兔:新西蘭白兔常用于實(shí)驗(yàn)室制備抗體,及被用來(lái)作過(guò)敏反應(yīng)的研究。由 IgG和IgE引出的過(guò)敏反應(yīng)臨床癥狀相似,機(jī)理都是抗原抗體結(jié)合和血小板-白細(xì)胞凝集形成沉淀物,釋放藥理活性物質(zhì)(組織胺和5-羥色胺)進(jìn)入肺循環(huán),在右心的流出道中產(chǎn)生一種機(jī)械和藥理的聯(lián)合作用,導(dǎo)致循環(huán)性虛脫。
(五)狗:狗的免疫球蛋白有IgG、IgM、IgA、IgG1、IgG2。 在狗花粉病和各種蠕蟲(chóng)感染中發(fā)現(xiàn)IgE。
Lewis等認(rèn)為狗對(duì)顆粒性抗原能較好地產(chǎn)生抗體,但新生狗初次免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的抗體幾乎是IgM類(lèi),成年狗產(chǎn)生的抗體幾乎是IgM和IgG,這兩種球蛋白的數(shù)量與初生狗的IgM幾乎相等。新生狗在再次反應(yīng)中能合成IgG和IgM。
除人之外,狗是對(duì)氣溶膠出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)的唯一的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,狗是研究人的變態(tài)反應(yīng)和氣喘的適宜的實(shí)驗(yàn)?zāi)P。狗由豚草花?Raweed pillens)致敏后,血液和皮膚中出現(xiàn)IgE抗體。
二、腫瘤學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
腫瘤的實(shí)驗(yàn)?zāi)P鸵话氵x用小鼠和大鼠。
(一)昆明小鼠 肉瘤180(S180)、肉瘤37(S37)、艾氏癌腹水型(EAC)、艾氏癌實(shí)體型(EC)、肝癌實(shí)體型(Heps)、Harding-Passey黑色素瘤等,可接種昆明小鼠制備實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型。
(二)615小鼠 用于小鼠網(wǎng)織細(xì)胞白血病L615的實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀?br />(三)DBA/2小鼠 用于小鼠淋巴細(xì)胞白血病L1210的實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀?br />(四)C57BL/6小鼠 用于Lewis肺癌,黑色素瘤B16,小鼠乳腺癌M5076的實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀?br />(五)Wistar大鼠 用于瓦克癌肉瘤W256,軟骨肉瘤,吉田肉瘤腹水型的實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀?br />三、藥理學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
藥理學(xué)研究中一般選用小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等。
(一)急性毒性試驗(yàn) 常用小鼠,體重18~22g,雌雄均可。每次5~10只,尾靜脈注射或腹腔注射一定劑量藥液,觀察有無(wú)不良反應(yīng)(如驚厥、四肢癱瘓、步伐不穩(wěn)、豎毛、呼吸抑制等)或死亡現(xiàn)象。一般觀察24~48小時(shí)。
成人體重以50kg計(jì)算,小鼠以20g計(jì)算,即人的體重大于小鼠體重2,500倍。如人用劑量為2ml,小鼠給0.5ml不引起死亡,即小鼠最大耐受量相當(dāng)于人用劑量的625倍以上。倍數(shù)越大,毒性越小。一般認(rèn)為,按體重計(jì)算小鼠最大耐受量相當(dāng)人用劑量的100 倍以上則較安全,可以提供臨床使用。
(二)亞急性和慢性毒性試驗(yàn)
可選小鼠,方法和急性毒性試驗(yàn)基本相似,但劑量小,小鼠按體重計(jì)算每天用人用劑量的20~50倍口服或腹腔注射,連續(xù)觀察1~8周。慢性毒性試驗(yàn)則需3~6個(gè)月。觀察體重、進(jìn)食量、進(jìn)水量的變化,以及有無(wú)其它不良反應(yīng)或死亡( 包括內(nèi)臟肉眼觀察或組織切片檢查)。必要時(shí)作血象、肝腎功能化驗(yàn)檢查。該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)也常用大鼠。
(三)半數(shù)致死量的測(cè)定 半數(shù)致死量簡(jiǎn)稱(chēng)LD50,是指引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物半數(shù)死亡的劑量。由于個(gè)體差異,同一劑量藥物給同種異體的動(dòng)物,可以出現(xiàn)死亡或不死亡,LD50表示藥物的毒性時(shí)比較靈敏準(zhǔn)確。一般以每Kg多少mg表示(藥物劑量/體重)。臨床應(yīng)用時(shí)一般取1/5~1/10 LD50開(kāi)始試用,觀察毒性和療效。由小劑量,到大劑量逐步試用至不能耐受為止。從中找出療效滿(mǎn)意、毒性小的劑量,再作深入觀察。
測(cè)定LD50時(shí)常選用小鼠,體重18~22g,雌雄均可,每次實(shí)驗(yàn)需30-60只,一般分5~6組,每組6~10只。給藥途徑與臨床應(yīng)用相同,有口服、腹腔注射、靜脈注射。給藥容量以每鼠0.5ml左右為宜。根據(jù)藥物出現(xiàn)作用的快慢,一般觀察1~4或24~72小時(shí)。 以死亡為主要指標(biāo)。
(四)過(guò)敏試驗(yàn)
取豚鼠6只,體重250~350g,每隔日腹腔注射藥液0.5ml,共注射 3次。然后分成2組,分別在第一次注射藥物的第14天及21天再?gòu)念i靜脈注射原藥液1ml。如有過(guò)敏反應(yīng),則在注射藥物后幾分鐘內(nèi),豚鼠表現(xiàn)興奮不安,呼吸困難,迅速窒息死亡。
(五)熱原檢查
熱原是由細(xì)菌產(chǎn)生的一種毒素。注射劑中若含有熱原,會(huì)使人發(fā)燒。
檢查熱原使用的動(dòng)物是家兔,一般選用3只,體重1.5kg以上,注射藥物前測(cè)量肛門(mén)體溫3次,取平均值(家兔的正常體溫38.5~39.6℃)。然后耳靜脈注射藥液(1~2ml/Kg),注射藥物后1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)各測(cè)體溫1次。如3兔體溫升高均不超過(guò)0.6℃,即合格,說(shuō)明無(wú)熱原。
四、其它醫(yī)學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
(一)計(jì)劃生育中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
篩選口服避孕藥的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物多使用嚙齒類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,大鼠、小鼠等,因?yàn)樗鼈兙哂幸?guī)律的動(dòng)情周期,排卵有明顯的指標(biāo),易于檢測(cè),價(jià)格便宜。而具有月經(jīng)周期的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物反而不常被選擇。因?yàn)檫@類(lèi)動(dòng)物來(lái)源困難,價(jià)格昂貴,排卵和月經(jīng)周期難于檢測(cè)。長(zhǎng)期以來(lái),對(duì)男用避孕藥的研究不很重視,進(jìn)展緩慢。藥物能抑制精子的生成過(guò)程;干擾男性生殖活動(dòng)的激素調(diào)節(jié);干擾副性腺和改變精液的理化特性,均可達(dá)到不孕的目的。常選用成年雄性大白鼠,如觀察藥物對(duì)大鼠生殖率的影響,精子數(shù)的影響,精子活動(dòng)力的影響以及對(duì)雄性激素的影響。
(二)病毒學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
病毒學(xué)研究中常選用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有金黃地鼠、小白鼠、豚鼠、家兔、綿羊、禽類(lèi)、猴等。分離病毒廣泛使用的是乳鼠,它對(duì)柯薩基病毒、呼吸道病毒和蟲(chóng)媒病毒感染有很高的易感性。
選用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不僅考慮它的易感性,還考慮接種途徑,例單純皰疹病毒的易感動(dòng)物為家兔、豚鼠,接種途徑分別是角膜、腦內(nèi)和肉趾。
常見(jiàn)病毒敏感動(dòng)物的選擇:病毒易感動(dòng)物的研究,一直是病毒學(xué)中的重要內(nèi)容之一。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在人類(lèi)病毒學(xué)發(fā)展史上起重要作用,主要用作分離病毒、抑制病毒的藥物篩選、疫苗效果及安全性鑒定、制備病毒診斷試劑等。
1. 黃熱病毒: 靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物都易感,最為敏感的動(dòng)物是恒河猴, 另外可用中國(guó)猴(Macacus Sinicus)及斷尾猴(M.Speciosus Thibetanus)。小鼠對(duì)黃熱病毒也敏感, 在沒(méi)有經(jīng)濟(jì)實(shí)力,使用靈長(zhǎng)類(lèi)時(shí),可用小鼠。令人感興趣的是:純血清接種的小白鼠尚能存活,而以稀釋血清接種的小白鼠卻于較短時(shí)間死亡。這一奇特現(xiàn)象的理由,可能是由于病人體內(nèi)血清抗體早期出現(xiàn)之故。應(yīng)用純血清時(shí),這些抗體中和了病毒的作用,而當(dāng)應(yīng)用稀釋血清時(shí),抗體濃度不足,但病毒在稀釋后仍然具有活力。
2. 乙腦病毒:乙腦病毒屬于披蓋病毒的B組蟲(chóng)蝶病毒。實(shí)驗(yàn)室內(nèi),乳鼠和成年小白鼠腦內(nèi)接種后發(fā)生致死性腦炎,腹腔內(nèi)接種后乳鼠發(fā)生致死性腦炎。恒河猴、食蟹猴和成年倉(cāng)鼠腦內(nèi)接種后發(fā)生致死性腦炎,但周?chē)緩浇臃N時(shí)只發(fā)生無(wú)癥狀的病毒血癥。豚鼠和兔腦內(nèi)或周?chē)臃N,蝙蝠、小雞、和蒼鷺周?chē)臃N后都只發(fā)生無(wú)癥狀的病毒血癥。蝙蝠可保持感染,經(jīng)過(guò)冬眠后重新發(fā)生病毒血癥。
3. 淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(LCMV):本病毒屬沙粒病毒屬, 對(duì)小白鼠腦內(nèi)接種尤為敏感,可供分離病毒用,對(duì)猴及豚鼠有致病力。應(yīng)使用4周齡的小鼠及乳鼠、未斷乳豚鼠和200-400g重的豚鼠?赡軙r(shí),采用“瑞士”Albinos種小鼠。飼養(yǎng)中, 應(yīng)確保無(wú)LCM病毒感染。為取得最好效果,一方面接種幼年動(dòng)物,另一方面用年齡較長(zhǎng)的。接種量如下:
6-8天齡乳鼠:腦內(nèi)接種0.03ml,腹腔接種0.2ml。4周齡小鼠:腦內(nèi)接種0.03ml ,腹腔接種0.25ml。未斷乳的小鼠:腦內(nèi)接種0.05ml,腹腔接種1ml。已斷乳的200- 400g豚鼠腦內(nèi)接種0.15ml,腹腔接種5ml。
不同接種途徑的感受性亦不同。腦內(nèi)接種感染而發(fā)病的鼠數(shù)(4周齡以上的) 遠(yuǎn)比經(jīng)腹腔內(nèi)接種者為多。經(jīng)腹腔接種者可不顯任何癥狀。豚鼠(250g以上)二種接種途徑的發(fā)病數(shù)大致相等(有時(shí)腦內(nèi)接種稍高些),但這些資料并不對(duì)所有毒株適用。小白鼠感染后表現(xiàn)多樣,可能有三種情況:①急性疾病并死亡;②急性疾病,恢復(fù)并產(chǎn)生抗體;③形成持續(xù)感染,攜帶病毒,不產(chǎn)生抗體。
產(chǎn)生急性疾病的動(dòng)物一般在感染后4-7天出現(xiàn)體征,表現(xiàn)為弓背、豎毛、嗜睡、 眼炎、頭部水腫等。
4. 脊髓灰質(zhì)炎病毒:屬小核糖核酸(RNA) 病毒科、 腸道病毒屬的一種。 1908 年Landsteiner和Popper成功地把此病毒傳播于猴。在后來(lái)的40 年里證明了亞人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)能經(jīng)消化道感染。
猴子:在此屬內(nèi)猩猩能感染和人類(lèi)完全相似的疾病。但此類(lèi)動(dòng)物不易常備。實(shí)際工作中,各種不同的獼猴對(duì)本病來(lái)說(shuō)是猿類(lèi)中最為優(yōu)良的品種,特別是Macacus Rhesus。長(zhǎng)尾猴類(lèi)以及狒狒類(lèi)對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒亦有感受性,唯敏感性遠(yuǎn)較獼猴為差。接種方法可用腹腔注射、坐骨神經(jīng)附近的深部肌肉注射、鼻腔滴注。實(shí)際操作中最好以不同方法混合接種。
嚙齒動(dòng)物:病毒在應(yīng)用嚙齒動(dòng)物前,常需經(jīng)猿類(lèi)適應(yīng)1-2代。嚙齒動(dòng)物(棉鼠、小白鼠、田鼠、鼷鼠)可經(jīng)腦內(nèi)接種,最好選用年幼的動(dòng)物、2-3周齡的小白鼠或15天齡的棉鼠。動(dòng)物常于12-25天出現(xiàn)麻痹。
5. 柯薩基(Coxsackie)病毒:屬小RNA病毒科腸道病毒屬。 根據(jù)本病毒對(duì)乳鼠的致病情況將其分成兩組。A組:產(chǎn)生彌漫性肌炎伴有隨意肌纖維的急性炎癥及壞死。B組:主要引起大腦局部退行性變化等。
6. 流感病毒,屬于正粘液病毒屬。動(dòng)物模型最好選用雪貂,也可用小白鼠、 金黃地鼠、豚鼠、猴及豬。
7. 麻疹病毒:除靈長(zhǎng)類(lèi)外,一般動(dòng)物均不易感。1911年首次成功的傳給獼猴。 以后證明,除了接種和吸入外,其它種類(lèi)的猴,如:猿類(lèi)、恒河猴、崇猴、爪哇猴、矮猴等,對(duì)各種不同接種途徑也易感染。其癥狀類(lèi)似人類(lèi)麻疹。潛伏期為3-22天,病毒血癥期為4-15天,約一半動(dòng)物有皮疹、結(jié)膜炎、卡它和發(fā)熱。
適應(yīng)在組織培養(yǎng)上的病毒可在乳鼠或乳地鼠體內(nèi)繁殖,腦內(nèi)接種可引起腦膜炎癥狀。
8. 呼吸道合胞病毒:猩猩感染后可產(chǎn)生與人一樣的上呼吸道臨床癥狀。 猴, 如Cebus猴感染本病毒后,可引起肺炎。在肺和支氣管都可以找到呼吸道合胞病毒抗原。Cobues猴感染后4-6天,病毒繁殖方可達(dá)到高峰,并出現(xiàn)臨床癥狀。
地鼠和棉鼠對(duì)呼吸道合胞病毒較敏感,感染后,在其細(xì)支氣管及肺可以找到呼吸道合胞病毒。
9. 狂犬病毒(Rabies Virus):1987年Galfiev首先用家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,進(jìn)行了傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn),在該實(shí)驗(yàn)中,巴德斯培育了對(duì)犬致病力減弱而對(duì)家兔具有固定潛伏期的毒株。實(shí)驗(yàn)室感染實(shí)驗(yàn),常選用中國(guó)地鼠、小白鼠、豚鼠和兔(按敏感性程度排列)。
顱內(nèi)接種比皮下或肌肉注射更可靠。
10. 天花病毒:猴及家兔均敏感。應(yīng)選用雄兔作皮膚劃痕接種、角膜劃痕接種、睪丸內(nèi)接種。猴子則在脅腹部皮膚上作劃痕,如系雄猴則同時(shí)作睪丸內(nèi)接種。感染后兔皮膚劃痕處出現(xiàn)明顯的皮疹;角膜炎輕微或缺如,無(wú)睪丸炎;猴沿皮膚劃痕出現(xiàn)典型皮疹,如做睪丸內(nèi)接種,則有睪丸炎發(fā)生。
11. 單純皰疹病毒(HSV):家兔為最適宜的動(dòng)物,豚鼠、小白鼠、地鼠也可用。 用家兔及豚鼠的原因之一,是因?yàn)榭梢杂糜芯牧献鼋悄そ臃N而可不加抗菌素或過(guò)濾,不妨礙病毒生長(zhǎng)。
12. 水痘-病毒帶狀皰疹(VZV)、 巨細(xì)胞病毒:還未發(fā)現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)這兩種病毒敏感。
13. 甲型肝炎病毒(HAV):1976年Deinhardt等首次證明HAV可在絨猴體內(nèi)增殖, 此后Mascoli等從絨猴體內(nèi)發(fā)現(xiàn)人類(lèi)HAVCR326株。絨猴、黑猩猩、紅面猴對(duì)HAV均易感,經(jīng)口或靜脈注射接種病毒后,可產(chǎn)生肝炎。
14. 乙型肝炎病毒(HBV):黑猩猩是HBV的易感動(dòng)物,絨猴雖可感染但不如前者敏感。因此用黑猩猩研究HBV的發(fā)病機(jī)理、檢測(cè)自動(dòng)免疫、被動(dòng)免疫的效果以及HBV疫苗的安全性。
目前為止,各種病毒敏感動(dòng)物的研究,仍然是病毒學(xué)中引人矚目的領(lǐng)域,因?yàn)樵诓煌《炯膊“l(fā)病機(jī)制的研究、抗病毒藥物篩選、疫苗效果及安全性鑒定等方面,動(dòng)物模型都有其獨(dú)特的優(yōu)越性。但就病毒分離而言,使用組織培養(yǎng)的方法,對(duì)于某些病毒更為方便。不同實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)其實(shí)驗(yàn)?zāi)康、?dòng)物來(lái)源情況等,選擇不同的敏感動(dòng)物。
(三)老年病研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
隨著社會(huì)的發(fā)展、經(jīng)濟(jì)衛(wèi)生狀況的改善和科學(xué)技術(shù)的日益進(jìn)步,人類(lèi)的平均壽命也越來(lái)越長(zhǎng),老年人在總?cè)丝谥械谋壤粩嘣黾樱虼死夏瓴⊙芯恳殉蔀樯镝t(yī)學(xué)研究的重要課題。
目前,用于老年醫(yī)學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以哺乳類(lèi)動(dòng)物為主體,有小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬、猴等,其中大鼠使用最多,并廣泛用于各種項(xiàng)目的研究,其中以細(xì)胞生化學(xué)、消化器、激素、酶等的研究為主。小鼠的使用率雖比大鼠低,但用途廣泛,以放射線、消化器、免疫、酶的研究為主。魚(yú)類(lèi)、兩棲類(lèi)、爬蟲(chóng)類(lèi)以及無(wú)脊椎動(dòng)物等,絕大多數(shù)被用以比較生物學(xué)的研究。對(duì)各研究項(xiàng)目每年所使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)進(jìn)行調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在DNA、染色體、放射性、細(xì)胞生物學(xué)、培養(yǎng)細(xì)胞、腦神經(jīng)、循環(huán)器、呼吸器、腎臟、消化器、內(nèi)分秘、運(yùn)動(dòng)器、皮膚、感覺(jué)器、結(jié)締組織、RNA等眾多項(xiàng)目中, 大鼠、小鼠的使用量最高;在糖質(zhì)、脂質(zhì)、膠原和免疫項(xiàng)目中,小鼠的使用率比大鼠高; 在比較生物學(xué)的研究中,所有的動(dòng)物使用量差不多。
非哺乳動(dòng)物在老年醫(yī)學(xué)研究中也被選用,如果蠅、沙蚤、蚯蚓、輪蟲(chóng)、水螅、原蟲(chóng)等。天津醫(yī)學(xué)院老年實(shí)驗(yàn)室推薦以果蠅做為老年學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型較為適宜,果蠅的生存期短、繁殖快、高度純種、飼養(yǎng)管理簡(jiǎn)便。
(四)中醫(yī)中藥研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
中醫(yī)中藥的研究由經(jīng)驗(yàn)進(jìn)入了實(shí)驗(yàn)研究階段,已建立了:“陽(yáng)虛”、“陰虛”、“脾虛”、“脈微欲絕”、“血虛”、“血瘀”、“肝郁”、“寒證”、“熱證”、“溫病”及“里實(shí)”等11種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P。其造型的思路和方法除個(gè)別者外,均是選擇一些造成與臨床證型相仿的致病因素,作用于動(dòng)物機(jī)體使其產(chǎn)生類(lèi)似臨床某些證的模型。
中醫(yī)證型動(dòng)物模型造型方法:
1. “衛(wèi)氣營(yíng)血”模型:選用家兔, 體重2.1~2.75kg。用強(qiáng)毒力的大腸桿菌以0.75ml(每ml含大腸桿菌27億)/kg體重,注射至兔耳緣靜脈造型。感染后動(dòng)物表現(xiàn)圈縮、懶動(dòng)、少食、體溫升高、心率增快、耳血管周?chē)鷿B血、出血;舌象有明顯病理改變;血培養(yǎng)有大腸桿菌生長(zhǎng),白細(xì)胞及血小板顯著減少。可100%造型成功。
2. “寒證、熱證”模型:選用雌性大鼠,體重170~210g。熱證型:用溫?zé)崴?附子、干姜、肉桂、黨參、黃芪、白術(shù))制成100%水煎劑灌胃,每次2ml,每日2次。寒證型:首先于腹腔內(nèi)注射三聯(lián)疫苗1ml,每日1次共2次;然后給予寒冷藥(膽草、黃連、黃柏、銀花、連翹、石膏)制成的100%水煎劑灌胃,每日2次,每次2ml。給藥后15天60-70 %造型成功。熱證型:心率加快,飲水量增多,尿內(nèi)兒茶酚胺及17- 羧皮質(zhì)類(lèi)固醇排出量增多。寒證型:心率減慢,尿內(nèi)兒茶酚胺及17-羧皮質(zhì)類(lèi)固醇排出量減少。 用此模型可測(cè)量痛閾和驚厥閾值及腦內(nèi)介質(zhì);觀察動(dòng)情周期及血內(nèi)孕酮含量。
3. “血瘀”模型:高粘滯血癥模型:選用家兔,耳緣靜脈注入10 %葡萄糖生理鹽水,每公斤體重注入5ml,可100%造型成功。給藥后可見(jiàn)微循環(huán)血流變慢,紅細(xì)胞聚集,全血及血漿粘度增加,血沉快,紅細(xì)胞電泳變慢。此模型適用于“活血化瘀”藥物作用原理的研究。
4. “血虛”模型:選用雄性大鼠,體重180~250g。于實(shí)驗(yàn)第1、4、7天皮下注射2%乙;诫(Acety-Phenyhydrazine,APH)生理鹽水溶液,以每100g 體重計(jì), 第一次1ml,第2、3次0.5ml。給藥后可形成實(shí)驗(yàn)性溶血性貧血。紅細(xì)胞與血紅蛋白減少,出現(xiàn)大量海氏(Heine)小體。可維持9~14天。此模型適用于血虛與氣虛藥物的研究。
5. “脾虛”模型:選用雄性大鼠,以大黃、玄明粉、旋明粉水煎劑和大黃、番瀉液灌胃給藥,給藥后動(dòng)物發(fā)生腹瀉、消瘦、食量下降、精神不振,毛發(fā)欠光澤,基本符合臨床脾虛病人癥狀。
6. “肝郁”模型:選用大鼠和小鼠。小鼠腹腔注射艾葉注射液0.6ml(含生藥0.3g),每日1次,分別于45天及60天處死。大鼠腹腔注射艾葉注射液2ml(含生藥2.0g)每日1次,半月后改為隔日1次40天處死。艾葉中毒后動(dòng)物易激怒,好斗,咬人,進(jìn)食量少,體重增加慢。小鼠:肝臟有灶性壞死,以60天組較45天組為重。大鼠:肝細(xì)胞腫脹,胞漿疏松出現(xiàn)顆粒,門(mén)區(qū)有嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn),中央靜脈充血。