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小鼠組織切片免疫組化實(shí)驗(yàn)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

材料
二甲苯,酒精(100%,95%),EDTA抗原修復(fù)工作液(pH8.0,稀釋50倍使用),0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4(稀釋10倍使用), DAB顯色液(臨用前配制:試劑盒A、B、C各50ul,于1ml水中混勻)。
方法
1. 石蠟切片置60℃烘箱中烘烤過(guò)夜
2. 二甲苯中脫蠟,梯度酒精入水(無(wú)水乙醇,95%酒精),浸泡于蒸餾水中待用
3. 抗原修復(fù)
取500mlEDTA抗原修復(fù)工作液于1000ml燒杯中,在小功率電爐上加熱,至似沸微沸(為了防止脫片)。將組織切片緩慢放入燒杯。繼續(xù)加熱,保持液體在微沸狀態(tài)20分鐘。將燒杯移開(kāi)火源,室溫下自然冷卻后取出切片,蒸餾水洗1次3分鐘,TBS洗2次每次3分鐘。
4. 每張切片加一滴或50ul 3%過(guò)氧化氫溶液,室溫下孵育10min, 以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。 TBS沖洗3次,每次3min。
5. 除去TBS液,加一滴或50ul 一抗(滅活PLB免疫小鼠所得到的多抗,1:3000稀釋?zhuān),陰性?duì)照采用普通血清, 室溫下孵育2小時(shí),或4℃過(guò)夜。
6. TBS洗3次,每次5min,除去TBS液,每張切片加一滴或50ul polymer enhancer(試劑A), 室溫下孵育20min, TBS沖洗3次, 每次3min。
7. 除去TBS液,每張切片加一滴或50ul 過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗鼠/兔聚合物(試劑B),室溫下孵育30min,TBS洗3次,每次3min。
8. 除去TBS液,每張切片加一滴或50ul 新鮮配制的DAB,顯色3-10min。
9. 自來(lái)水沖洗,蘇木素復(fù)染10min,水沖洗。0.1%的鹽酸分化,自來(lái)水沖洗,TBS返藍(lán)。
10. 不需脫水,直接用中性樹(shù)脂封片。
注意事項(xiàng)
1.抗原修復(fù)時(shí)必須保證切片始終能浸泡在液體內(nèi),一定要等工作液冷卻后才能將切片取出

 

 
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