材料與試劑
以布氏桿菌病平板凝集反應(yīng)為例。
1.玻璃板、刻度吸管等。
2.布氏桿菌平板凝集抗原、布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清。
操作方法
1.取潔凈玻板一塊,用玻璃鉛筆劃成方格,并注明待檢血清號(hào)碼。
2.。.2ml吸管分別吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格內(nèi)。大規(guī)模檢驗(yàn)時(shí),可只做2個(gè)血清量,大動(dòng)物用0.04ml和0.02ml,中小動(dòng)物用0.08ml和0.04ml。每檢一個(gè)樣品需換一只吸管。
3.每格內(nèi)加布氏桿菌平板凝集抗原0.03ml,滴在血清附近,而不要與血清接觸。用牙簽(或火柴桿)自血清量最小的一格起,將血清與抗原混勻,每份血清用一根牙簽。
4.混合完畢,將玻板置凝集反應(yīng)箱上均勻加溫或采用別的辦法適當(dāng)加溫,使溫度達(dá)到3
結(jié)果判定
++++:出現(xiàn)大的凝集塊,液體完全清亮透明,即100%凝集。
+++。河忻黠@的凝集片,液體幾乎完全透明,即75%凝集。
++ 。河锌梢姷哪,液體不甚透明,即50%凝集。
+ 。阂后w混濁,有小的顆粒狀物,即25%的凝集。
- 。阂后w均勻混濁,即不凝集。
以出現(xiàn)++凝集的血清最高稀釋倍數(shù)作為該份血清的凝集價(jià)。大動(dòng)物(牛、馬、駱駝等)以0.02ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為布氏桿菌病血清陽(yáng)性,0.04ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為可疑。中小動(dòng)物(豬、山羊、綿羊等)以0.04ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為該份血清為布氏桿菌病陽(yáng)性血清,0.08ml出現(xiàn)凝集價(jià)判為可疑。
注意事項(xiàng)
1.每次試驗(yàn)必須以標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清進(jìn)行對(duì)照。
2.加抗原前必須搖勻。
3.反應(yīng)溫度最好保證在
長(zhǎng)判讀時(shí)間。
4.如用兩個(gè)血清量作試驗(yàn),任何一個(gè)血清量出現(xiàn)凝集反應(yīng)時(shí),則需要用四個(gè)血清量重檢。
5.平板凝集反應(yīng)最好是用于初篩,如出現(xiàn)陽(yáng)性或可疑反應(yīng),再用試管凝集反應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢,以定性。
6.平板凝集反應(yīng)與試管凝集反應(yīng)的關(guān)系。
表 平板凝集反應(yīng)與試管凝集反應(yīng)的關(guān)系
平 板 凝集 反 應(yīng) |
0.08 |
0.04 |
0.02 |
0.01 |
試管凝集反應(yīng) |
1︰25 |
1︰50 |
1︰100 |
1︰200 |