采用RNA變性電泳法檢測(cè)RNA質(zhì)量,方法如下:
⑴ 凝膠制備:
制備1.2%瓊脂糖凝膠(電泳槽體積為50ml)
① 稱取0.6g瓊脂糖,加入43.5ml水,加熱溶解并降溫到60℃。
② 加入5ml 10×甲醛變性電泳緩沖液,并加入1.5ml 37%的甲醛,混合均勻。
③ 倒入電泳槽中制膠(甲醛有毒,制膠應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行)。
⑵ RNA模板準(zhǔn)備(5~7.5μg total RNA)
① 制備如下混合液 (9.7μl)
10×甲醛變性電泳緩沖液: 1.25μl
37%的甲醛: 2.2μl
甲酰胺: 6.25μl
② 加入2.8μl RNA,使總體積達(dá)到12.5μl
③ 混合后離心5~10 sec(1 000~2 000 r/min)
④ 55℃加熱15 min
⑤ 加入2.5μl甲醛凝膠加樣緩沖液,再加點(diǎn)EB(約0.2~0.5μl),混合后離心5 sec
⑥ 將樣品加入點(diǎn)樣孔
⑦ 在5v/cm的電壓下電泳至溴酚藍(lán)帶跑到電泳槽中央(20cm長(zhǎng)電泳槽,用95v電壓,1小時(shí)左右)