1.用蒸餾水將電泳槽和梳子沖洗干凈.放在水平桌面上,并架好梳子.
2.根據(jù)核酸分子量的大小配制不同濃度的瓊脂糖凝膠,一般200~400bp的DNA片段, 可配制1.2~1.7%濃度的瓊脂糖用于電泳.
3.配制0.5XTBE電泳緩沖液100ml于三角燒瓶中,稱取一定量的瓊脂糖粉放入后沸水鍋 或微波爐內加熱熔化.冷卻至60℃(需要時可加入溴乙錠),倒入電泳槽中,待凝固.
4.向電泳槽中倒入0.5XTBE,其量以沒過膠面2mm為宜,小心移去梳子.如樣品孔內有 氣泡,應設法除去.
5.在DNA樣品中加入0.2體積的載樣緩沖液,混勻后,加入樣品孔內.
6.接通電源,一般紅色為正極黑色為負極,切記DNA樣品由負極往正極泳動(靠近加樣 孔的一端為負).電壓為1-5V/cm(長度以兩個電極之間的距離計算).
7.根據(jù)指示劑泳動的位置,判斷是否終止電泳.一般200~400bp的PCR產物50V電壓, 電泳20~40min即可.
8.溴化乙錠染色后,紫外儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標準比較被擴 增產物的大小.