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Qβ復(fù)制酶反應(yīng)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
Kacian等于1972年首次報(bào)報(bào)Qβ復(fù)制酶(Q-beta replicase)催化RNA模板的自我復(fù)制功能,它能在常溫30min,將其天然模模MDV-1RNA擴(kuò)增至109.1986年Chu等報(bào)道用生物標(biāo)記的靶序列特異性探針,可與親和素聯(lián)接的MDV-1RNA雜交,經(jīng)洗脫未被結(jié)合的MDV-1后,再加入Qβ復(fù)制酶,擴(kuò)增復(fù)制MDV-1拷貝,然后用溴乙錠染色檢測(cè)或用同源性的第二探針雜交.
  Qβ復(fù)制酶是一種RNA指導(dǎo)的RNA聚合酶,它有3個(gè)特點(diǎn):①不需寡核苷酸引物的引導(dǎo)就可啟動(dòng)RNA的合成.②能特異地識(shí)別RNA基因中由于分子內(nèi)堿基配對(duì)而形成的特有的RNA折疊結(jié)構(gòu).③在Qβ復(fù)制酶的天然模板MDV-1RNA的非折疊結(jié)構(gòu)區(qū)插入一短的核酸序列不影響該酶的復(fù)制.因而,如在此區(qū)插入核酸探針,則其序列照樣可能被Qβ復(fù)制酶擴(kuò)增.
  1988年Lizardi等,將靶基因序列插進(jìn)MDV-1質(zhì)粒里,用T7RNA聚合酶催化轉(zhuǎn)錄出MDV-1RNA探針,這種RNA探針可與靶序列雜交,然后洗去非雜交的探針,加入Qβ復(fù)制酶來(lái)擴(kuò)增探針,被擴(kuò)增的探針又可作為模板進(jìn)行擴(kuò)增,并呈指數(shù)遞增.其產(chǎn)物按上述兩種方法進(jìn)行檢測(cè).現(xiàn)在該技術(shù)又發(fā)展了夾心雜交法,分子開(kāi)關(guān)和靶依賴的復(fù)制等技術(shù).
 
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