組織化學(xué)或細(xì)胞化學(xué)染色(histochemical or cytochemical staining)是利用染色劑可同細(xì)胞的某種成分發(fā)生反應(yīng)而著色的原理,對(duì)某種成分進(jìn)行定性或定位研究的技術(shù)。利用這種方法對(duì)細(xì)胞的各種成分幾乎都能顯示,包括有無(wú)機(jī)物、醛、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、核酸、酶等。
(一)、固定
目的是將細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)物質(zhì)雙重地保存下來(lái),固定細(xì)胞的方法有:
1.物理固定:如血膜空氣快速干燥、冷凍干燥或直接冷凍切片。
2.化學(xué)固定:如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和鋨酸等試劑均能對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和其中的某些化學(xué)物質(zhì)加以固定保存。不同化學(xué)試劑所保存的化學(xué)成分、對(duì)酶活性的影響、保存結(jié)構(gòu)的細(xì)膩度均不相同。因此,要根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和組化反應(yīng),選擇最佳的固定方法和固定劑。如顯示多糖常用乙醇固定,而顯示酶類多用甲醛丙酮緩沖液固定。
(二)、顯示方法
1.金屬沉淀法:利用金屬化合物在反應(yīng)過(guò)程中生成有色沉淀,借以辨認(rèn)所檢查的物質(zhì)或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反應(yīng)產(chǎn)物最終生成CoS或PbS有色沉淀,而顯示出酶活性。
2.偶氮偶聯(lián)法:酚類化合物與偶氮染料結(jié)合后可以形成耐曬染料。
3.Schiff反應(yīng):細(xì)胞中的醛基可使Schiff試劑中的無(wú)色品紅變?yōu)榧t色。這種反應(yīng)通常用于顯示糖和脫氧核糖核酸(Feulgen反應(yīng))。
4.聯(lián)苯胺反應(yīng):過(guò)氧化物酶分解H202。產(chǎn)生新生氧,后者再將無(wú)色的聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán),進(jìn)而變成棕色化合物。
5.普魯士藍(lán)反應(yīng):三價(jià)鐵與酸性亞鐵氰化鉀作用,形成普魯士藍(lán)。
6.Formazane反應(yīng):顯示脫氫酶。
7.“Nadi”反應(yīng):顯示細(xì)胞色素氧化酶。
8.脂溶染色法:借蘇丹染料溶于脂類而使脂類顯色。
9.茚三酮反應(yīng):顯示蛋白質(zhì)。