（1）在肉膏蛋白胨斜面試管上，用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。

（2）點燃酒精燈或煤氣燈。

（3）將菌種試管和待接種的斜面試管，用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中，并將中指夾在兩試管之間，使斜面向上，成水平狀態(tài)。在火焰邊用右手松動試管塞，以利于接種時拔出。

（4）右手拿接種環(huán)通過火焰燒灼滅菌（參照實驗一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，并迅速燒灼管口。

（5）將滅菌的接種環(huán)伸入菌種試管內，先將環(huán)接觸試管內壁或未長菌的培養(yǎng)基，達到冷卻的目的，然后再挑取少許菌苔。將接種環(huán)退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜面試管，用環(huán)在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線，勿將培養(yǎng)基劃破，也不要使環(huán)接觸管壁或管口。

（6）接種環(huán)退出斜面試管，再用火焰燒管口，并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環(huán)逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環(huán)上沾的菌體較多時，應先將環(huán)在火焰邊烤干，然后燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出污染環(huán)境，接種病原菌時更要注意此點。

二、液體培養(yǎng)基接種

向肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種少量菌體時，其操作步驟基本與斜面接種時相同，不同之處是挑取菌體的接種環(huán)放入液體培養(yǎng)基后，應在液體表面處的管內壁上輕輕磨擦，使菌體從環(huán)上脫落，混進液體培養(yǎng)基，塞好試管塞后，搖動液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。

向液體培養(yǎng)基中接種量大或要求定量接種時，可將無菌水或液體培養(yǎng)基注入菌種試管，用接種環(huán)將菌苔刮下，再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養(yǎng)基。如果菌種為液體培養(yǎng)物，則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養(yǎng)基。整個接種過程都要求無菌操作。

三、穿刺接種

用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養(yǎng)基的中心垂直地刺入半固體培養(yǎng)基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針。

上述幾種接種法的無菌操作，凡未敘述的均按實驗一操作。試驗者應反復練習無菌操作接種技術，直至較熟練地掌握。

四、將已接種的斜面、液體和半固體培養(yǎng)基放置28—30℃溫箱，培養(yǎng)2—3天后取出觀察結果。