麥?zhǔn)媳葷峁苁?/span>McFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的,有表可查,這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同,且都有定值。麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔热缦拢?/span>
這是傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁艿呐渲品椒,目前也有市售的商品化產(chǎn)品,不需要自己配制,并且還有由乳膠粒子懸浮液制成的麥?zhǔn)媳葷峁埽c傳統(tǒng)的麥?zhǔn)媳葷峁芟啾,保存時間更長也更穩(wěn)定。但麥?zhǔn)媳葷峁芫唧w應(yīng)該怎ô使用呢?
操作方法:
1、輕搖標(biāo)準(zhǔn)試管。
2、無菌操作將被測定的肉湯培養(yǎng)物加到與標(biāo)準(zhǔn)管相同直徑(大小)的無菌試管中。
3、以無菌操作向被測定試管加入無菌生理鹽水(NaCl),直到濃度與所要求的標(biāo)準(zhǔn)管的濃度相同。
4、直接用眼睛看(需要經(jīng)驗,誤差較大)。
5、找張白紙,打上平行直線,然后觀察讀數(shù)(如圖示,利用光在不同濃度液體折射不同)。
注意事項:
1、如果測定的肉湯培養(yǎng)物不澄清,由培養(yǎng)物的值減去δ接種培養(yǎng)基的值來校正細(xì)菌濃度。4號管(肉湯培養(yǎng)物)-1號管(孵育過的δ接種的肉湯管)=3號管(校正讀數(shù))。
2、如果肉湯顏色很深,把δ接種試管放在標(biāo)準(zhǔn)管的后面讀數(shù)即可。
3、測定好的細(xì)菌,最好做一下梯度稀釋涂布計數(shù)。
4、此濃度是對應(yīng)的大腸桿菌的濃度,如果是其他細(xì)菌,會有一定的差別,但通常差別都在一個數(shù)量級之內(nèi),適合于普通實驗。
5、此種方法測定的準(zhǔn)確性不是很高,如果是對細(xì)菌數(shù)量要求較精確的,請用紫外分光光度計。
6、麥?zhǔn)媳葷嵋簯?yīng)放室溫暗處保存,用前混勻,有效期為6個月。應(yīng)用時為了準(zhǔn)確也可以使用比濁儀但一定要防止麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管δ搖勻或已過期失效。
在微生物學(xué)檢驗中,麥?zhǔn)媳葷岱ǔW鳛榧?xì)菌鑒定、實驗配制菌液時大致判斷菌液濃度的一種方法,通常認(rèn)為,如將配菌液濃度配成0.5麥?zhǔn)媳葷峁軙r,相當(dāng)于1.0×108細(xì)菌數(shù)/mL,由于方法本身就是一種估計的方法,所以盡管不同細(xì)菌大小差異很大,但除了真菌孢子,細(xì)菌的差別不大,結(jié)果不會有影響。
另附孢子菌懸液制作方法:
菌種活化
將保藏菌接種在PDA斜面培養(yǎng)基試管中,培養(yǎng)7d~14d,使生成大量孢子。δ制備孢子懸液時,不得拔去棉塞。ÿ打開1支只供制備1次懸液,ÿ次制備孢子懸液必須使用新培養(yǎng)的ù菌孢子。
孢子懸液制備
在上述PDA斜面培養(yǎng)基中加入少量無菌蒸餾水,用無菌接種環(huán)輕輕刮取表面的新鮮ù菌孢子,將孢子懸液置于250mL錐形瓶內(nèi),然后注入40mL洗脫液。
錐形瓶中加入直徑5mm的玻璃珠10!15粒與孢子混合,具塞后置水浴振蕩器中不斷振蕩使成團(tuán)的孢子散開,然后用單層棉紗布過濾以除去菌絲。將其裝入滅菌離心管中,用離心機(jī)分離沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脫液,重復(fù)離心操作3次。制成濃度為(0.8~1.2)×106spores/mL的ù菌孢子懸液。若需要精確計數(shù),則可以用改良察氏液體培養(yǎng)基稀釋孢子懸液,用血球計數(shù)板計數(shù)。孢子懸液應(yīng)在當(dāng)天使用,若不在當(dāng)天使用應(yīng)在 3℃~7℃保存,并盡量在4d內(nèi)使用。