在畜禽的養(yǎng)殖過程中,遺留在動物體內(nèi)的獸藥殘留隨著食品在市場中的流通進(jìn)入人體,威脅著食用動物性食品消費者的身體健康。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測獸藥殘留技術(shù)具有適應(yīng)性強(qiáng)、靈敏度高等特點,在我國禽畜農(nóng)產(chǎn)品獸藥檢測領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。
在日常使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測獸藥殘留時,遇到的實驗問題的討論。
1. 檢測像磺胺和沙星類等可以作為人用藥品的獸藥殘留檢驗項目時,要注意防止實驗人員對樣品的污染。
尤其是氯霉素這種常作為人用滴眼液和外用藥膏的藥物,極易通過直接接觸污染實驗室環(huán)境。
所以在樣品制備和實驗過程中,實驗人員需佩戴實驗手套并經(jīng)常更換。同時做過加標(biāo)實驗的實驗器皿盡量不要重復(fù)使用,使用過的實驗設(shè)備要清洗干凈。
2. 在粉碎制備樣品時,使用的器具需要清洗干凈并晾干后,再繼續(xù)使用。
3. 樣品提取液需要氮吹時,為防止交叉污染:注意提前清洗氮吹針外壁;使用完氮吹儀后,要對氮吹針再次進(jìn)行清洗。
4. 進(jìn)行孔雀石綠類項目的檢測時,注意記號筆的污染。
5. 實驗所選用的0.22μm液相濾膜,應(yīng)采用與樣品最終定容液溶劑相同的標(biāo)準(zhǔn)溶液檢驗。確認(rèn)濾膜無吸附和溶解現(xiàn)象后,方可使用。
6. 實驗試劑優(yōu)先選擇色譜純級別的試劑,防止實驗試劑的污染。
1.有些藥物在樣品組織作用位置不同,所以在樣品中分布并不均勻。所以在樣品制備時的采樣量必須足夠大,并且試樣需要混合均勻。
2.連續(xù)使用同一樣品進(jìn)樣瓶多次進(jìn)樣,檢查液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的系統(tǒng)穩(wěn)定性。
3.使用同位素內(nèi)標(biāo)定量的實驗:
稱取試樣加入同位素內(nèi)標(biāo)后,需要充分振蕩混合樣品,并靜置30分鐘以上。使同位素內(nèi)標(biāo)充分吸附于樣品。否則內(nèi)標(biāo)并未吸附于樣品組織,直接被提取液提取,造成實驗結(jié)果偏低。
需注意同位素內(nèi)標(biāo)的添加濃度與樣品組分檢出的濃度不可相差太大,否則同位素內(nèi)標(biāo)的回收率不易具有代表性,影響定量的準(zhǔn)確性。
4.隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫等不穩(wěn)定項目,進(jìn)樣液不要過夜。
5.使用固相萃取柱時,注意控制樣品流速:
流速過快,固相萃取柱的吸附易不完全,容易造成實驗回收率不穩(wěn)定;流速過慢,固相萃取柱可能會吸附過多雜質(zhì),容易影響實驗結(jié)果。
6.固相萃取柱和QuEChERS試劑盒開封后要保存在陰涼干燥處,防止吸水失效。
7.注意液相濾膜和液相進(jìn)樣小瓶等可能對四環(huán)素類藥物有吸附現(xiàn)象。
1.需注意樣品基質(zhì)對離子對響應(yīng)值的影響?赏ㄟ^增大稀釋倍數(shù)減小來基質(zhì)干擾,或者使用空白樣品基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.注意樣品最終定容液對響應(yīng)值的影響。盡量使用與標(biāo)準(zhǔn)品或者流動性組成比例一致的定容液。
3.可采取加標(biāo)實驗和制作基質(zhì)加標(biāo)曲線等方法,驗證檢驗結(jié)果。
4.配置標(biāo)準(zhǔn)曲線時,曲線范圍盡量使檢出的樣品濃度居于標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度的中間,同時標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍不可太寬。
5.注意液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的儀器穩(wěn)定性,標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的進(jìn)樣時間不可間隔過長。