1. 色譜分析法
體內(nèi)藥物分析中, 色譜技術(shù)(Chromatography )一直是研究體內(nèi)藥物及其代謝物最強(qiáng)有力的手段,其在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用始于上世紀(jì)八十年代。由于其具有分離和分析的雙重功能,且有很高的選擇性和較高的靈敏度,因而可同時(shí)分析結(jié)構(gòu)相似的藥物和代謝物等。色譜法可分為薄層色譜法(TLC)、薄層掃描法(TLCS)、氣相色譜法 (GC)、高效液相色譜法 (HPLC)及高效毛細(xì)管電泳法 (HPCE)等。
色譜法中以高效液相色譜法最為常用,特別是反相高效液相色譜法 (RP-HPLC)更具有試劑價(jià)廉、方法簡(jiǎn)單和適應(yīng)范圍廣等優(yōu)點(diǎn),現(xiàn)已成為體內(nèi)藥物分析方法中最重要的方法,并常作為體內(nèi)藥物分析中評(píng)價(jià)其它方法的參比方法。
GC法在體內(nèi)藥物分析方法中也占有重要地位,雖然該法只限于高揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性的化合物,但通過(guò)化學(xué)衍生化技術(shù)可使應(yīng)用范圍大大增加。特別值得一提的是毛細(xì)管氣相色譜法,由于其柱效高,可分析復(fù)雜的混合物(如興奮劑的檢查),因而在體內(nèi)藥物分析中具有很好的應(yīng)用前景。
高效毛細(xì)管電泳(HPCE) 是20世紀(jì)80年代后期發(fā)展起來(lái)的經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物, 是一類(lèi)以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力的新型液相分離分析技術(shù)。它分離模式多, 分離效率高, 速度快, 適用范圍廣, 所需樣品、試劑用量少, 在體內(nèi)藥物分析中得到廣泛應(yīng)用。根據(jù)分離模式的不同,又可分為毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE),毛細(xì)管凝膠電泳(CEC),毛細(xì)管等電聚焦(CIEF),膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MEKC)等,CZE是目前應(yīng)用最廣泛的毛細(xì)管電泳分離模式。
2. 聯(lián)用分析法
目前使用較廣泛的為色譜聯(lián)用分析法和色譜與核磁共振聯(lián)用分析法。
色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用是應(yīng)用于藥物分析中最為活躍的技術(shù), 能夠使樣品的分離、定性、定量一次完成。色譜技術(shù)為質(zhì)譜分析提供了純化的試樣, 質(zhì)譜則提供準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)信息。
液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)是目前最重要的分離分析方法之一,HPLC的高分離性能和MS的高選擇性,高靈敏度及豐富的結(jié)構(gòu)信息相結(jié)合,已成為體內(nèi)藥物分析研究中強(qiáng)有力的工具。分析前樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單, 一般無(wú)需衍生化或水解, 更適合于體內(nèi)藥物的分離和鑒定。
GC-MS聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)是一門(mén)成熟的分析鑒定技術(shù), 適合于揮發(fā)性強(qiáng)、熱穩(wěn)定的藥物的分離。
隨著核磁共振(NMR)儀在靈敏度、分辯率、動(dòng)態(tài)范圍等方面技術(shù)的提高, 色譜, 特別是HPLC與NMR 儀直接聯(lián)用已成為可能, 并已經(jīng)成為體內(nèi)藥物分析中有力的結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)之一。
3.免疫分析法
免疫分析法(Immunoassay , IA)的原理是利用抗原-抗體的特異反應(yīng)來(lái)測(cè)定體內(nèi)藥物的含量。它將分析方法與免疫原理相結(jié)合,進(jìn)行超微量分析,具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速用量少、樣品一般不需進(jìn)行預(yù)處理等優(yōu)點(diǎn)。因此,該法特別適合分析大批量的低濃度的體液樣品。其缺點(diǎn)是測(cè)定藥物的種類(lèi)受試劑盒(Kit)供應(yīng)的限制,且測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度不如色譜法。
根據(jù)對(duì)抗原標(biāo)記方法的不同,免疫分析法可分為放射免疫分析 (RIA)、酶免疫分析 (EIA)、化學(xué)發(fā)光免疫分析 (CLIA)及熒光免疫分析 (FIA)等。在體內(nèi)藥物分析中免疫分析方法已成為一種必不可少的基本檢測(cè)技術(shù)。
4. 光譜分析法
光譜分析法 (Spectroscopic Analysis)包括比色法(COL)、紫外分光光度法 (UV)、熒光分光光度法 (FLUOR)和原子吸收分光光度法 (AAS)。光譜分析法是體內(nèi)藥物分析中應(yīng)用較早的方法之一。其特點(diǎn)是儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,測(cè)定快速簡(jiǎn)便。但由于這些方法本身不具分離功能,易受到結(jié)構(gòu)相近的其它藥物、代謝物及內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾,因而其應(yīng)用正逐漸減少,僅適用于分析一些濃度較高、含干擾成分較少的樣品。但是光譜法中的熒光分析法由于靈敏度高,可分析濃度極低的藥物(10-13g/ml),而成為體內(nèi)藥物分析中不可缺少的方法。此外,原子吸收分光光度法在測(cè)定體液中微量金屬元素方面也占有特殊的地位。
5. 電化學(xué)分析法
電化學(xué)分析法 (Electrochemical Analysis)是一類(lèi)基于電池內(nèi)發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)而建立起來(lái)的方法。測(cè)定時(shí),通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)碾姌O組成化學(xué)電池,以測(cè)定電壓、電流、電阻、電量等電信號(hào)強(qiáng)度變化來(lái)對(duì)藥物進(jìn)行定性和定量分析。該類(lèi)方法的特點(diǎn)是儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,易于實(shí)現(xiàn)測(cè)試的連續(xù)化和自動(dòng)化。本法由于受到方法靈敏度和選擇性的限制,不如色譜法、免疫法應(yīng)用廣泛,但在測(cè)定體內(nèi)某些離子性化合物以及具有電活性的藥物時(shí)具有獨(dú)特的作用。