1.HPLC對流動(dòng)相的一般要求
流動(dòng)相就比如人體的血液,其質(zhì)量直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行與否。
(1)應(yīng)該使用HPLC級的溶劑,不能互相混溶的溶劑不可以直接切換!一般在水相和與其不混溶的溶劑切換時(shí),使用異丙醇作為過渡溶劑。
(2)注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的最低波長,低于該波長后,溶劑會(huì)有很強(qiáng)的紫外吸收,從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對所分析物質(zhì)的檢測。
(3)HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時(shí),必須把使用水的管路用有機(jī)溶劑置換,防止長霉。
(4)儀器使用完后要采用適當(dāng)?shù)娜軇_洗等方法維護(hù)色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。
(5)儀器長期不用時(shí),不建議使用純乙腈封存。因?yàn)橐译嬗猩删酆衔锏内厔。建議使用甲醇、甲醇/水或乙腈/水封存。
(6)當(dāng)有流路堵塞時(shí),可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會(huì)縮短溶劑過濾器的使用壽命,并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH4至7)中尤其如此。
2.泵的使用要點(diǎn)
(1)將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面或較高處。當(dāng)在四元泵上使用鹽溶液或有機(jī)溶劑時(shí),建議將鹽溶液接在下面的梯度閥口上,將有機(jī)溶劑接在上面的梯度閥口上,有機(jī)溶劑通道最好在水或鹽溶液通道的正上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出的鹽結(jié)晶。
(2)操作泵之前,用至少兩個(gè)體積(標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)30mL,對微脫氣機(jī)10mL)沖洗真空脫氣機(jī),特別是當(dāng)泵關(guān)閉了一段時(shí)間后(例如,過夜),以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時(shí),防止溶劑瓶內(nèi)的玻璃濾頭(過濾器)堵塞及長菌,當(dāng)濾頭表面有黑色或黃色污染層說明發(fā)生了堵塞,應(yīng)立即清洗或更換。
(3)定期檢查排液閥的過濾白頭。檢查方法:擰開排液閥,以水作流動(dòng)相。
(4)對于標(biāo)準(zhǔn)脫氣機(jī)(G1322A)來說,流速為5mL/min水,若壓力大于10bar,則建議更換。
(5)對于微量脫氣機(jī)(G1379A)來說,流速為2mL/min水,若壓力大于5bar,則建議更換。
(6)當(dāng)使用低流速時(shí),檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏(用壓力測試或漏液測試。每當(dāng)更換泵密封墊時(shí)排液閥慮芯也應(yīng)更換。
(7)更換活塞密封墊時(shí)檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導(dǎo)致輕度滲漏,并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。
(8)使用緩沖溶液時(shí),關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當(dāng)需要長時(shí)間使用0.1摩爾或更高濃度的緩沖液時(shí),最好選用密封墊清洗附件,以減少對密封墊及活塞桿的磨損。
(9)如果使用了高濃度的緩沖鹽,可以考慮用熱水(50-60℃)來沖洗鹽通道來確保沒有緩沖鹽殘留在系統(tǒng)中。
(10)更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對其進(jìn)行磨合,但磨合不適用于正相密封墊。
(11)當(dāng)泵頭安裝有柱塞清洗附件時(shí),由于該附件中也有密封墊,這樣就會(huì)增加活塞桿運(yùn)動(dòng)時(shí)的阻力。所以開泵前一定要用10%異丙醇,并將其流速調(diào)至約2-3滴/分鐘使溶液流過沖洗裝置。(對于二元泵SL,如果不使用鹽溶液可以不開)10%異丙醇有助于降低水的表面張力,并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。
當(dāng)泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10%異丙醇,會(huì)使密封墊及活塞桿的壽命減短(二元泵SL除外),泵頭如果發(fā)出“吱吱”聲不影響使用和泵的精度如果有必要,可以改變壓縮因子(compressibility)來達(dá)到更好的效果。
3. 自動(dòng)進(jìn)樣器
(1)樣品在進(jìn)樣前必須經(jīng)過適當(dāng)?shù)念A(yù)先處理,需要經(jīng)過亞微米濾膜的過濾或者離心,防止樣品中的微小顆粒堵塞管路,最好使用流動(dòng)相作為溶劑配制樣品,所用溶劑應(yīng)該對樣品有較好的溶解性。
(2)針座是喇叭口朝上暴露在空氣中的,有時(shí)空氣中的較大灰塵顆?赡芮『寐湓卺樧牧髀穬(nèi)而引起針座的堵塞。這時(shí)候可以嘗試卸下針座,將它接在泵的出口上反沖,一般能解決問題。
(3)如果經(jīng)常使用緩沖溶液,除了泵頭之外,ALS計(jì)量泵的柱塞及密封圈,六通閥的轉(zhuǎn)子密封圈和定子密封圈應(yīng)該定期清洗,防止有鹽的顆粒磨損ALS一定要使用Agilent的樣品瓶及瓶蓋;使用不兼容的或者加工精度差的樣品瓶及瓶蓋會(huì)引起ALS故障率的增加及性能的降低。
4. DAD常見故障及維護(hù)
(1)故障
(2)HPLC日常維護(hù)
(3) HPLC常見故障診斷