方法一:
1.收集細胞(5×106)1000r/min,離心5min,去上清。
2.PBS洗一次,1000r/min,離心5min,去上清。
3.加細胞核裂解液500μl重懸細胞,50℃水浴,3~5h,不時振搖或37℃過夜。
4.加0.5ml平衡酚抽提,上下顛倒幾次混勻,6000r/min,離心5min。
5.上清移至另一Ep管,加0.5ml氯仿:異戊醇抽提,上下顛倒幾次混勻,6000r/min,離心5min。
6.上清移至另一Ep管,加50μl的3mol/L乙酸鈉和2ml預(yù)冷無水乙醇,上下顛倒幾次混勻,可見絮狀白色沉淀物。
7.置液氮5~10min,12 000r/min離心10min沉淀DNA,去上清,真空抽干或風扇下吹干殘存液體。
8.加50~100μl TE緩沖液,另加5μl RNase,37℃水浴30min。
9.取20μl加上樣緩沖液2~5μl,1%瓊脂糖凝膠電泳(電壓50V,1.5~2h),UV下觀察。
方法二:
1.離心收集細胞(5×106),PBS(無Ca2+和Mg2+)洗1~2次。
2.0.5ml TBE溶液重懸,37℃孵育30min。
3.1mg/ml蛋白酶K 37℃處理30min。
4.加入上樣緩沖液0.1ml。
5.25μl上樣,1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳,2V/cm 6h。
方法三:
1.收集細胞懸液(106細胞),低速離心(1000r/min,離心5min)。
2.去上清,沉淀加0.4ml低滲緩沖液作用1h。
3.13 000r/min,離心10min,將上清轉(zhuǎn)移至另一Eppendorf管中,加等量50%異丙醇和0.5mol/L NaCl混勻,置液氮5min。
4.12 000r/min,離心10min,棄上清,沉淀真空抽干。
5.加TE 100μl,65℃加熱10min,取20μl,加1~2μl上樣緩沖液,電泳觀察。
方法四:
1. 收集細胞,1000r/min離心5min,去上清。
2.用冰預(yù)冷的70%乙醇固定,可長期保存于-20℃冰箱。
3.1000r/min離心5min,去除固定液,用約0.5ml的PBS重懸細胞。
4.轉(zhuǎn)入Eppendorf管中,同法離心,去上清。
5.細胞用40μl PC緩沖液重懸,室溫30~60min。
6.1000r/min離心5min,吸上清于新的Eppendorf管中,真空濃縮15min。
7.加入0.25% NP-40溶液3μl,1mg/ml RNase A溶液3μl,37℃,30min。
8.加入3μl蛋白酶K,37℃,30min。
9.加入12μl樣品稀釋液,含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖電泳,觀察。