1.按MTT檢測法培養(yǎng)細(xì)胞和用不同稀釋度的細(xì)胞因子處理細(xì)胞。
2.吸去培養(yǎng)液,用PBS洗滌兩次(如為懸浮細(xì)胞,應(yīng)在吸去上清液前先離心)。
3.每孔加60μl NAG染液,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)。
4.每孔加90μl終止液,混勻后置酶聯(lián)檢測儀上測定光密度(OD)值,檢測波長402nm。以O(shè)D值對(duì)樣品稀釋度作圖,比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細(xì)胞因子的含量。