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液相色譜流動(dòng)相哪些事!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2022-09-14
核心提示:   色譜分析中不可缺少的,它可以是氣體、液體、也可以超臨界流體等。常見(jiàn)的流動(dòng)相主要有:乙腈-水溶液、乙腈-醋
 

 

 

色譜分析中不可缺少的,它可以是氣體、液體、也可以超臨界流體等。常見(jiàn)的流動(dòng)相主要有:乙腈-水溶液、乙腈-醋酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。今天咱們就總結(jié)下,流動(dòng)相的選擇與儲(chǔ)存秘訣,以及試劑混合會(huì)導(dǎo)致的一些色譜故障,再以及流動(dòng)相長(zhǎng)霉時(shí)應(yīng)該如果處理的問(wèn)題!

 

 


     

流動(dòng)相溶劑的選擇

1.所選用的流動(dòng)相溶劑要有一定的化學(xué)穩(wěn)定性,不與固定相和樣品組分起反應(yīng),其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過(guò)程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。

  2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測(cè)器的工作,溶劑應(yīng)與檢測(cè)器匹配,選擇不影響檢測(cè)器正常工作應(yīng)選擇在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)無(wú)吸收的流動(dòng)相。

  3.在制備分離中, 溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去, 不干擾對(duì)分離組分的回收。

  4.溶劑的粘度要小,保證合適的柱壓降。

  5.從實(shí)用角度考慮,溶劑應(yīng)當(dāng)價(jià)格低廉,容易購(gòu)得,使用安全,純度要高。

 

秘訣1由強(qiáng)到弱:

一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn),這樣可以很快地得到分離結(jié)果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。

 

秘訣2三倍規(guī)則:

每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中,注意觀察各個(gè)峰的分離情況。

 

秘訣3粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):

當(dāng)分離達(dá)到一定程度,應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。

 

流動(dòng)相的配制要點(diǎn)要記得

 

1.配制不含水的有機(jī)溶劑類流動(dòng)相所用量筒應(yīng)區(qū)分開(kāi),必須是干燥的,不得有水。

2.流動(dòng)相的抽濾。含水流動(dòng)相和不含水流動(dòng)相的抽濾裝置應(yīng)區(qū)分開(kāi)。抽濾不含水的有機(jī)溶劑類流動(dòng)相所用裝置必須是干燥的,不得有水。

3.超聲波震蕩,除氣泡。

4.使用0.04%的疊氮鈉溶液以防止流動(dòng)相長(zhǎng)菌。

 

 

流動(dòng)相的儲(chǔ)存及標(biāo)識(shí)

 

 

將適量抽濾好的流動(dòng)相倒入流動(dòng)相專用儲(chǔ)液瓶,潤(rùn)洗一次后倒入廢液瓶,再將剩余流動(dòng)相全部倒入專用儲(chǔ)液瓶;填寫《流動(dòng)相標(biāo)簽》,并將標(biāo)簽貼在儲(chǔ)液瓶上。更換流動(dòng)相時(shí)應(yīng)及時(shí)更新《流動(dòng)相標(biāo)簽》。

 

 

流動(dòng)相效期

 

流動(dòng)相類別

效期

純甲醇

3個(gè)月

純乙腈

1個(gè)月

5%的甲醇/乙腈水溶液

15天

緩沖鹽溶液

3天

純化水

1天

甲醇與緩沖鹽混合溶液

7天

乙腈與緩沖鹽混合溶液

7天

 

例如:純甲醇使用日期是2015年06月11日,有效期至2015年09月10日;甲醇與緩沖鹽混合溶液配制日期是2015年03月10日,有效期至2015年03月16日。

 

不可忽略的步驟

 

加鹽流動(dòng)相做完實(shí)驗(yàn)沖洗步驟:

先用50%純水和50%有機(jī)相沖洗,然后逐漸將有機(jī)相將低到10%甚至5%,最后用100%有機(jī)相沖洗封柱,整個(gè)過(guò)程1h以上。若是沖洗一晚上,則用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速?zèng)_洗。

 

10%異丙醇在線沖洗密封墊:

10%異丙醇需定期更換,流動(dòng)相不加鹽時(shí),周期可以設(shè)置1min,沖洗0.2min;流動(dòng)相加鹽時(shí),周期設(shè)置1min,沖洗0.5min,最大為0.7min(長(zhǎng)期處于最大值會(huì)導(dǎo)致蠕動(dòng)泵磨損)。

 

流動(dòng)相更換:

流動(dòng)相瓶必須清洗干凈,含水流動(dòng)相需定期更換避免長(zhǎng)菌,純水2天換一次,進(jìn)樣前和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需不定時(shí)觀察流動(dòng)相有無(wú)沉淀。

 

流動(dòng)相瓶清洗:

先用酸液浸泡,然后用大量的自來(lái)水沖洗,接著用蒸餾水涮3次以上,最后一次用哇哈哈水潤(rùn)洗。

 

關(guān)于流動(dòng)相所用試劑

 

溶劑中的雜質(zhì)會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)“鬼峰”,特別是梯度解吸時(shí)。

 

溶劑混合產(chǎn)生的問(wèn)題:

 

樣品的溶解:

 

流動(dòng)相過(guò)濾頭產(chǎn)生的問(wèn)題

 

緩沖液的使用:

使用前必須過(guò)濾;

使用后一定要進(jìn)行清洗 ,以免造成腐蝕、磨損、阻塞:用純水沖洗30-60min(1ml/min),再用甲醇沖洗30min;

易受到細(xì)菌和霉菌的影響。

 

注意:不能直接用有機(jī)溶劑沖洗。

 

 

流動(dòng)相脫氣的必要性

 

 

更換流動(dòng)相時(shí)的注意事項(xiàng)

 

更換互溶流動(dòng)相時(shí)注意清洗吸濾頭;

更換不互溶流動(dòng)相時(shí)必須用中間過(guò)渡液清洗系統(tǒng),例如異丙醇;

更換緩沖液時(shí),應(yīng)用純水過(guò)渡;

更換流動(dòng)相后應(yīng)使用PURGE鍵快速排液。排去殘液或氣泡。

注意緩沖液的pH值與使用的色譜柱匹配

緩沖液必須過(guò)濾膜;

使用緩沖液期間,用注射器推純水,清洗柱塞桿,延長(zhǎng)泵密封墊壽命;

分析完后用純水清洗系統(tǒng)。

 

自動(dòng)進(jìn)樣器清洗液

如選擇不當(dāng)重現(xiàn)性不好;

常用1:1的甲醇水或不含鹽的流動(dòng)相;

清洗液必須過(guò)濾,經(jīng)常更換;

清洗液需對(duì)樣品有一定的溶解度;

不可用乙腈作為自動(dòng)進(jìn)樣器的清洗液。

關(guān)于流動(dòng)相的維護(hù):

 

1、如果不是做梯度洗脫,必須將有機(jī)相和水相分別配置的話。盡可能用混合好的流動(dòng)相,而不是用靠?jī)x器混合。尤其是水相為磷酸鹽溶液的時(shí)候,磷酸鹽溶液可是細(xì)菌的“培養(yǎng)基”哦,在夏天基本上1個(gè)晚上過(guò)來(lái),里面就有肉眼可見(jiàn)菌團(tuán)了。

2、如果非得用純的水相作為流動(dòng)相(通常是做梯度的時(shí)候),那么注意務(wù):必每天做完實(shí)驗(yàn)后將水相的管路用純水沖洗干凈,用有機(jī)相保存(如果水相不含鹽,直接用有機(jī)溶劑替換即可)。

3、如果有可能,請(qǐng)用煮沸過(guò)的水制備水相。

4、即使是混合好的流動(dòng)相,如果水相含鹽,有機(jī)相比例不高,那么也需要定期檢查,尤其是在夏天的時(shí)候。

 

文章(文字)來(lái)源:化學(xué)掌中寶。

編輯:songjiajie2010

 
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