1、什么是基質(zhì)效應
LC-MS/MS分析中非目標分析物作為樣品中的共流出物,對目標分析物的離子化會產(chǎn)生影響和干擾,這些影響和干擾就是基質(zhì)效應。
2、基質(zhì)效應的產(chǎn)生機制
在LC-MS中,基質(zhì)效應是由于非目標分析物與目標物共同流出噴霧針,對電荷產(chǎn)生競爭,它們將產(chǎn)生的霧滴牢牢吸在一起,阻止其分裂成更小的微滴,改變了帶電霧滴的表面張力,從而導致目標物的離子化效率降低或增強,引起響應降低或增高,便產(chǎn)生了所謂的基質(zhì)抑制效應或基質(zhì)增強效應。
3、基質(zhì)效應的來源
基質(zhì)效應主要來源于生物樣品的內(nèi)源性組分,經(jīng)前處理后仍存在于提取液中。包括離子顆粒物成分(電解質(zhì)、鹽類)、 強極性化合物(酚類、色素)和各種有機化合物(糖類、胺類、尿素、脂類、肽類及其分析目標物的同類物及其代謝物)。其中磷脂是最主要的內(nèi)源性組分, 其對電噴霧電離(ESI)和大氣壓化學電離 (APCI)均會產(chǎn)生離子抑制作用。含有P=O、-O-CO-NH-、OH、R-NH-、-N=、-NH-CO-NH- 等基團的農(nóng)藥通常表現(xiàn)出較強的基質(zhì)效應。
由樣品處理過程引入的外源性組分,同樣會產(chǎn)生基質(zhì)效應。主要包括無機離子、緩沖溶液、有機酸、離子對試劑、增塑劑、表面活性劑殘留、固相萃。SPE)小柱材料及色譜柱固定相流失物等。
4、基質(zhì)效應的評價
在實際工作中,可以將空白基質(zhì)匹配標準溶液與純?nèi)軇┡渲脴藴嗜芤核频玫臉藴是的斜率進行比較,來評價基質(zhì)效應的強弱。
計算公式如下:
其中, Sm:空白基質(zhì)匹配標準溶液制得的工作曲線的斜率;
Ss:純?nèi)軇┡渲频臉藴嗜芤褐频玫墓ぷ髑的斜率。
若 ME >0,表現(xiàn)為基質(zhì)增強效應,若 ME <0,表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應。當0≤|ME|≤20%時,說明基質(zhì)對信號干擾較低,可忽略不計;當 20%<|ME|<50%時,表現(xiàn)為中等強度的基質(zhì)干擾,而當|ME|≥50%,則為強基質(zhì)干擾。
5、基質(zhì)效應的消除和補償
(1)基質(zhì)凈化是最基本的消除基質(zhì)效應的方法。在農(nóng)殘和獸殘分析中,基質(zhì)凈化是不可缺少的,液液萃取法是經(jīng)典的提取方法,QuEChERS凈化法在農(nóng)殘分析中應用廣泛、固相萃取法是獸殘分析中常用的基質(zhì)凈化方法。通過優(yōu)化樣品前處理方法可以有效降低基質(zhì)效應的影響。
(2)空白基質(zhì)匹配標準校正法是是農(nóng)殘、獸殘分析中較為普遍的消除基質(zhì)效應的方法:先用某種基質(zhì)樣品,按照前處理稱樣,提取,凈化、濃縮后的提取物作為基質(zhì)空白溶液,將標準品配成各濃度的空白基質(zhì)匹配標液,制作標準曲線,用以對檢測結(jié)果進行校正。
(3)同位素內(nèi)標法被認為是補償基質(zhì)效應最有效的方法,即在標準品及樣品中同時加入相同濃度的待測物的同位素內(nèi)標物。這樣可以抵消質(zhì)譜離子化過程中的基質(zhì)效應和消除前處理過程之間的差異。
(4)選擇合適的色譜柱、合適的流動相的組成及流速(要控制緩沖鹽的濃度<10Mm/L,不要使用離子對試劑、表面活性劑等);調(diào)整色譜分離的時間及上樣量(如推遲目標峰出峰時間等);選擇合適的離子源(對于一些特定化合物,APCI源的基質(zhì)效應影響較ESI源要小)。