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HM44 大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒(HM44 HKM® E. COLI 0157)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-08-04   來(lái)源:食品伙伴網(wǎng)整理   瀏覽次數(shù):235
大腸桿菌O157乳膠凝集檢測(cè)試劑用于從糞便樣品中經(jīng)選擇性平板分離的可疑菌落進(jìn)行快速乳膠凝集確證鑒定。

一、用途

大腸桿菌O157乳膠凝集檢測(cè)試劑用于從糞便樣品中經(jīng)選擇性平板分離的可疑菌落進(jìn)行快速乳膠凝集確證鑒定?蓮牟∪烁篂a樣品中分離出的菌落快速區(qū)分大腸O157與其它大腸桿菌血清型。該試劑盒僅供專業(yè)人員使用。

 

二、原理

乳膠顆粒表面包被與大腸桿菌O157脂多糖抗原具有特異性的抗體。當(dāng)敏化的乳膠顆粒遇到含有O157抗原的菌懸液時(shí),可發(fā)生特異性、高靈敏度的免疫化學(xué)反應(yīng),使分散的乳膠微粒迅速形成肉眼可見的凝集。

 

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 測(cè)試試劑 HM44a 大腸桿菌O157乳膠測(cè)試試劑 2.5mL

乳膠顆粒包被與大腸桿菌O157具有特異性的兔抗血清。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(藍(lán)色瓶蓋)

REAG CONTROL  對(duì)照試劑 HM44b 對(duì)照乳膠試劑  2.5mL

乳膠顆粒包被不與大腸桿菌O157反應(yīng)的兔抗體,含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黑色瓶蓋)

NaCl 0.85%  0.85%鹽水 HM40 0.85%生理鹽水 5.0mL

0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(白色瓶蓋)

 

使用說(shuō)明書

檢測(cè)板

攪拌棒

 

需要的其它材料

l  接種環(huán)

l  山梨醇麥康凱瓊脂(含1%D-山梨醇不含乳糖的麥康凱瓊脂)

 

四、警告和注意事項(xiàng)

安全:

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應(yīng)形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測(cè)可疑致病菌時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應(yīng)作中和處理。

 

檢測(cè)過(guò)程:

1、試劑盒應(yīng)按說(shuō)明書使用。

2、所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內(nèi)的任何試劑

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內(nèi)的試劑。

6、不要使檢測(cè)乳膠試劑的滴管接觸到陽(yáng)性對(duì)照試劑或細(xì)菌樣品。

7、使用前應(yīng)確保檢測(cè)板清潔干燥。

8、試驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意檢測(cè)過(guò)程中的質(zhì)量控制部分。

9、注意凝集狀態(tài),呈凝乳狀或纖維狀可能為非真實(shí)凝集。

 

五、貯存及保質(zhì)期

檢測(cè)試劑盒不使用時(shí)應(yīng)貯存在28℃,并應(yīng)在包裝盒標(biāo)簽上的有效期內(nèi)使用檢測(cè)試劑。

 

六、樣本

病人的樣品(血糞便樣品)應(yīng)在山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上分離培養(yǎng),3537℃有氧培養(yǎng)1824小時(shí)。產(chǎn)毒素的大腸桿菌O157H7菌落顏色為無(wú)色,菌落形態(tài)與其它的大腸桿菌相似。

 

七、檢測(cè)過(guò)程

質(zhì)量控制:

在每次使用檢測(cè)試劑盒前應(yīng)作下列質(zhì)量控制檢測(cè)以確證試劑的有效性

1、檢測(cè)試劑的控制:分別滴1滴測(cè)試試劑(HM44a)1滴對(duì)照試劑(HM44b)于檢測(cè)板的二個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。并在該兩個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)再分別各滴加1滴生理鹽水(HM40),各用1支攪拌棒在整個(gè)區(qū)域內(nèi)混勻液體,輕搖檢測(cè)板30秒,觀察2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)是否會(huì)出現(xiàn)凝集。如果出現(xiàn)凝集反應(yīng),表明測(cè)試試劑、對(duì)照試劑或生理鹽水可引起非特異性凝集,應(yīng)廢棄處理。

2、陽(yáng)性對(duì)照的控制:按測(cè)試程序(如下所述),在檢測(cè)板的二個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)各滴1滴已知的大腸桿菌O157菌懸液,輕搖檢測(cè)板30秒,觀察2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集。如果二個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)均無(wú)凝集反應(yīng),則分別滴1滴測(cè)試試劑(HM44a) 1滴對(duì)照試劑(HM44b)2個(gè)測(cè)試反應(yīng)環(huán)內(nèi),然后分別混勻檢測(cè)試劑與菌懸液,輕搖檢測(cè)板,觀察2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)凝集結(jié)果,測(cè)試試劑反應(yīng)環(huán)內(nèi)應(yīng)出現(xiàn)明顯凝集,對(duì)照試劑反應(yīng)環(huán)內(nèi)應(yīng)無(wú)凝集發(fā)生。如果未出現(xiàn)此2種現(xiàn)象,說(shuō)明試劑失效或污染,應(yīng)廢棄處理。

 

測(cè)試程序:

1、各滴1滴(約30μL)生理鹽水(HM40)于檢測(cè)板的2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

2、用接種環(huán)從山梨醇表康凱瓊脂平板上挑取無(wú)色的可疑菌落。

3、與反應(yīng)環(huán)內(nèi)的生理鹽水混合,形成均勻的混濁的菌懸液,并將菌懸液均勻涂布于整個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)。

4、輕搖檢測(cè)板30秒,觀察是否會(huì)出現(xiàn)自動(dòng)凝集現(xiàn)象。如果菌懸液保持均勻狀態(tài),繼續(xù)第5步。如果菌懸液出現(xiàn)纖維狀或顆粒狀自凝現(xiàn)象,在加入乳膠試劑后易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,因此這種樣品不適合采用乳膠試劑檢測(cè)。應(yīng)選用其它方法檢測(cè)。

5、搖勻乳膠測(cè)試試劑。

6、將1滴乳膠測(cè)試試劑和1滴對(duì)照試劑分別滴加至2個(gè)反應(yīng)環(huán)內(nèi)的菌懸液。不要使試劑的滴管接觸到菌懸液。

7、兩個(gè)反應(yīng)環(huán)分別用1支干凈的攪拌棒將菌懸液和乳膠試劑混合均勻。

8、輕輕搖動(dòng)檢測(cè)板,在2分鐘內(nèi)觀察結(jié)果,凝集反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生明顯的乳膠顆粒凝集現(xiàn)象。

9、記錄結(jié)果后,將攪拌棒和檢測(cè)板進(jìn)行適當(dāng)?shù)南咎幚怼?/span>

 

八、結(jié)果說(shuō)明

按下表進(jìn)行判斷結(jié)果

測(cè)試試劑

對(duì)照試劑

結(jié)果

存在大腸桿菌O157

無(wú)大腸桿菌O157

非特異性凝集

結(jié)果不確定

 

九、使用的局限性

1、結(jié)果應(yīng)依據(jù)所有的臨床或?qū)嶒?yàn)室信息進(jìn)行判斷。

2、只可檢測(cè)山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上分離出的大腸桿菌典型菌落的純培養(yǎng)物。

3、乳膠凝集檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)采用傳統(tǒng)的大腸桿菌分型血清,即大腸桿菌O血清和H血清進(jìn)行確證試驗(yàn)。

4、大部分用HKM®大腸桿菌O157乳膠凝集試劑測(cè)試為陽(yáng)性結(jié)果的在山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上分離的不發(fā)酵山梨醇的菌落可初步鑒定為O157H7,但部分其它不發(fā)酵山梨醇的O157菌株(如H16)也可與乳膠試劑反應(yīng)。

5、HKM®乳膠試劑經(jīng)改良已特別降低了與赫氏埃希氏菌的交叉反應(yīng),但在極少數(shù)情況下,其可能引起交叉反應(yīng)。赫氏埃希氏菌與大腸桿菌O157可通過(guò)下列生化實(shí)驗(yàn)進(jìn)行區(qū)分:纖維二糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、氰化鉀肉湯生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)和是否產(chǎn)生黃色色素實(shí)驗(yàn)。(參考資料見附錄)

   項(xiàng)目

大腸桿菌O157

赫氏埃希氏菌

纖維二糖發(fā)酵

陰性

陽(yáng)性

氰化鉀肉湯

陰性

陽(yáng)性

黃色色素

陰性

陽(yáng)性

6、自動(dòng)形成凝集現(xiàn)象的菌懸液不可用乳膠試劑盒檢測(cè)。

 

十、檢測(cè)效果對(duì)比

在一家醫(yī)院的微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)HKM®大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒檢測(cè)臨床樣品的效果進(jìn)行測(cè)試,被診斷為腹瀉、出血性結(jié)腸炎和溶血性尿毒癥綜合癥的474病人的血糞便樣品,用HKM®大腸桿菌O157乳膠凝集試劑盒及另一商業(yè)化的乳膠凝集試劑對(duì)其中47株不發(fā)酵山梨醇的菌株進(jìn)行測(cè)試均為陽(yáng)性結(jié)果。這些菌株經(jīng)傳統(tǒng)生化試驗(yàn)驗(yàn)證均為大腸桿菌O157菌株。

靈敏度 47/47100%

 

十一、重復(fù)性

在質(zhì)量控制檢測(cè)過(guò)程中,采用一組已詳細(xì)規(guī)定的樣品進(jìn)行監(jiān)控批間重復(fù)性,并且批間重復(fù)性已得到確證。

 

附錄:

1. Borczyk A, Lior H and Cebin B. 1987 False positive identification of Escherichia coli in foods. Int. J. Food. Protection. 4:347-349.

廣東環(huán)凱微生物科技有限公司  電話:020-32077703
編輯:foodnews

 
 
  
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