檢測點

檢驗項目

技 術 要 求

檢驗方法

采樣方法

檢測頻率

判定

方案

工器具、

案板等接觸面

（生產(chǎn)現(xiàn)場）

菌落

總數(shù)

≤5000個/25cm2

（生）

≤2500個/25cm2（熟）

梯度稀釋，傾注接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，36±1℃,48h后計數(shù)，報告

用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面，取25cm2的面積，在其內涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢

1次/周/車間

一項不合格判為不合格品。不合格品按《不合格品控制程序》執(zhí)行

大腸

菌群

≤30MPN/25cm2（生）

陰性（熟）

試管法：梯度稀釋，三個稀釋度接種LST肉湯培養(yǎng)基各三管，36±1℃,48h后記錄產(chǎn)氣管數(shù)，然后復發(fā)酵，記錄產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報告

員工手

（生產(chǎn)現(xiàn)場）

菌落

總數(shù)

≤5000個/手（生）

≤2500個/手（熟）

梯度稀釋，傾注接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，36±1℃,48h后計數(shù)，報告

被檢人五指并攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢

1次/周/車間

大腸

菌群

≤90MPN/手（生）

陰性（熟）

試管法：梯度稀釋，三個稀釋度接種LST肉湯培養(yǎng)基各三管，36±1℃,48h后記錄產(chǎn)氣管數(shù)，然后復發(fā)酵，記錄產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報告

空

氣

車間

菌落

總數(shù)

≤30個/皿

平板暴露法：車間在30m2以上者，于東、西、南、北（距墻1m處）、中五點；小于30m2者，于一條對角線里、中、外三點，高度均在1.5m處采樣，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露30 min

取樣后的瓊脂培養(yǎng)基于37℃溫箱培養(yǎng)48h后觀察結果，求出5個或3個采樣點的平均菌數(shù)

2次/月/車間

更衣室

菌落

總數(shù)

≤40個/皿

生產(chǎn)用水

菌落

總數(shù)

≤100CFU/ml

梯度稀釋，傾注接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，36±1℃,48h后計數(shù)，報告

對待取樣的水龍頭進行消毒，并打開水龍頭數(shù)分鐘，用經(jīng)過滅菌的玻璃采樣瓶去水樣0.5L后及時送檢，采樣后按照每125ml水樣加入0.1mg硫代硫酸鈉除去殘留余氯。

1次/月，全年檢測完所有水龍頭

大腸菌群

不得檢出

多管發(fā)酵法：

1、乳糖發(fā)酵試驗：接種5份10 mL水樣雙料培養(yǎng)基，每份接種10ml水樣，將接種管置36℃ 士l℃ 培養(yǎng)箱內，培養(yǎng)24h士2h，如所有乳糖蛋白膝培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸，則可報告為總大腸菌群陰性，如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則按下列步驟進行。

2、分離培養(yǎng)：將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，于36℃ 土1℃ 培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18h—24h，觀察菌落形態(tài)，挑取符合下列特征的菌落作革蘭氏染色、鏡檢和證實試驗。

3、證實試驗：經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽抱桿菌，同時接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，置36℃ 士1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h士2h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實有總大腸菌群存在。

4、結果報告：查MPN ( most Probable number，最可能數(shù)）檢索表，報告每l00ml水樣中的總大腸菌群最可能數(shù)（MPN）值。稀釋樣品查表后所得結果應乘稀釋倍數(shù)。如所有乳糖發(fā)酵管均陰性時，可報告總大腸菌群未檢出